主权项 |
一种便携快速检测赭曲霉毒素A的方法,特征在于:具体步骤如下:(1)按照参考文献:Xiang, Y.; Lu, Y.; Using personal glucose meters and functional DNA sensors to quantify a variety of analytical targets, Nature Chemistry, 2011, 3, 697‑703,采用巯基‑端炔修饰DNA、磺基‑4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸琥珀酰亚胺酯钠盐、蔗糖转化酶和三‑(2‑甲酰乙基)膦制备蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA;(2)将5.0 µL 0.05 µM的生物素‑叠氮修饰DNA 、10 µL 链霉素修饰的磁珠一起加入至25 µL PBS缓冲溶液中,PBS缓冲溶液的浓度为0.01 M,pH为7.3,在室温下震荡30分钟,促使生物素‑叠氮修饰DNA结合在磁珠表面;生物素‑叠氮修饰DNA序列从5’到3’端为:5’‑生物素‑GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA‑叠氮‑ 3’;(3)在步骤(2)反应结束后的PBS缓冲溶液中加入5.0 µL NaCl和不同浓度的赭曲霉毒素A,赭曲霉毒素A的浓度范围为0.2 ng/mL~50 ng/mL,在室温下震荡15分钟;反应结束后,采用磁铁进行第一次分离,弃去第一次上层清液,得到下层磁珠,并用PBS缓冲溶液清洗磁珠两次,清洗结束后在磁珠中加入50 µL PBS缓冲溶液混匀,得到含有结合在磁珠表面的叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A溶液;(4)取20 µL步骤(3)反应所得叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A溶液,加入2.5 µL步骤(1)所得蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA溶液、5.0 µL 0.1 mM CuSO<sub>4</sub>溶液、5.0 µL 1.0 mM抗坏血酸溶液,在室温下培育10分钟,让抗坏血酸还原Cu(II)得到Cu(I)化合物,催化蔗糖转化酶‑端炔修饰DNA与磁珠表面的叠氮修饰DNA‑赭曲霉毒素A发生点击化学反应,得到蔗糖转化酶修饰磁珠溶液;(5)步骤(4)反应结束后,对步骤(4)中所得到的蔗糖转化酶修饰磁珠溶液采用磁铁进行第二次分离,得到第二次上层清液;取10 µL第二次上层清液,加入至2.5 µL 2.0 M蔗糖溶液,在室温下反应20分钟,取3.0 µL溶液至血糖仪试纸上,采用血糖仪进行测量,绘制所测数值在不同赭曲霉毒素A浓度条件下的变化趋势图,根据该图就能检测赭曲霉毒素A的浓度。 |