一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法

摘要

本发明涉及一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，所述制备方法包含制备葡聚糖凝胶颗粒；制备各凝胶洗涤缓冲液；各抗体的选择；凝胶洗涤；分装等步骤，形成直接抗人球蛋白检测卡。通过本方法制备的直接抗人球蛋白检测卡具有灵敏度高、特异型好，稳定性强、保质期长、检测项目齐全等优势。

主权项

一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法，其特征在于：所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2 、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，所述制备方法包含以下步骤：步骤一、制备葡聚糖凝胶颗粒：选用至少两种交联葡聚糖凝胶进行混合，然后加入纯化水进行充分的悬浮溶胀，再用纯化水洗涤去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的葡聚糖凝胶颗粒；步骤二、制备各种凝胶洗涤缓冲液：（1）制备多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为10‑15g/L的牛血清白蛋白和15‑20g/L的蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6‑6.8；（2）制备抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为4‑8g/L的乙二胺四乙酸二钾盐、5‑10g/L的牛血清白蛋白和20‑22g/L蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6‑6.8；（3）制备抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为20‑25g/L的牛血清白蛋白和18‑26g/L的蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6‑6.8；（4）制备空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠1.75g‑2.07g/L、磷酸氢二钠0.185‑0.219g/L、磷酸二氢钠0.203‑0.24g/L、甘氨酸18‑21g/L；并调节 pH值为6.6‑6.8；步骤三、各抗体的选择：多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fy^a致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fy^a致敏的红细胞效价≥8；抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；步骤四、凝胶洗涤：取等量的葡聚糖凝胶颗粒分别用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液、抗IgG凝胶洗涤缓冲液、抗C3d凝胶洗涤缓冲液和空白凝胶洗涤缓冲液进行洗涤至少三次，再加入相对应的多特异性抗人球蛋白试剂、抗IgG试剂、抗C3d试剂和空白凝胶洗涤缓冲液进行混合，多特异性抗人球蛋白凝胶、抗IgG凝胶、抗C3d凝胶和空白凝胶；（5）分装：按照每管24‑32微升的量，将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和第C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。