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一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法，其特征在于包括：以青花菜子叶期保留下胚轴0.4‑0.6cm的幼苗为外植体，将外植体接种至含秋水仙素的双层分化培养基上诱导培养45‑50h，再经再生增殖直接产生四倍体芽，进而经后续培养获得同源四倍体青花菜；其中，所述的含秋水仙素的双层分化培养基由上层：MS基本培养基+ NAA 0.05‑0.1 mg/L +6‑BA 2.5‑3 mg/L+50‑60ml/L的椰汁+300‑350mg/L秋水仙素+30g/L蔗糖，pH5.8；及下层：MS基本培养基+ NAA 0.05‑0.1 mg/L +6‑BA 2.5‑3 mg/L +50‑60 ml/L的椰汁+30g/L蔗糖+7.8g/L琼脂，pH 5.8组成；所述的含秋水仙素的双层分化培养基中上层液体培养基的体积与下层固体培养基的体积的比例为2:9‑2:7；所述的方法包括如下步骤：1)双层培养诱导多倍体化：切取青花菜子叶期保留下胚轴0.4‑0.6cm的幼苗，预培养2d后，接种至含秋水仙素的双层分化培养基中,置于摇床上处理45‑50h，培养温度维持在23±2℃, 光周期维持在16/8 h 白/黑周期，光强度维持在2000lx；所述的预培养为切取子叶期保留下胚轴0.4‑0.6cm的幼苗接种到MS基本培养基+ NAA 0.05‑0.1 mg/L+6‑BA 2.5‑3 mg/L +椰汁50‑60ml/L+蔗糖30g/L+琼脂7.8g/L的培养基中培养2天，培养温度维持在23±2℃, 光周期维持在16/8 h 白/黑周期，光强度维持在2000lx；2)再生增殖：上一步处理后的外植体经无菌水冲洗3次后转到分化增殖培养基上分化增殖获得四倍体芽，所使用的分化增殖培养基为MS基本培养基+ NAA 0.05‑0.1 mg/L +6‑BA 2.5‑3 mg/L +椰汁50‑60ml/L +蔗糖30g/L+琼脂7.8g/L，pH5.8；培养温度维持在23±2℃, 光周期维持在16/8 h 白/黑周期，光强度维持在2000lx；3)再生植株的获得：40d后，将四倍体芽培养在无激素的MS基本培养基+80‑100ml/L椰汁+0.5g/L酸水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂7.8g/L的培养基中10‑15d，获得再生植株，培养温度维持在23±2℃, 光周期维持在16/8 h 白/黑周期，光强度维持在2000lx；4)再生植株的生根和驯化：将再生植株转入1/2 MS基本培养基+NAA 0.2mg/L +椰汁20‑30ml/L +蔗糖30g/L+琼脂7.8g/L的培养基中，培养温度维持在23±2℃, 光周期维持在16/8 h 白/黑周期，光强度维持在2000lx 培养15‑20d生根，然后驯化、练苗并移栽；5)再生植株的鉴定：移栽之前，取再生植株的根尖，在流式细胞仪鉴定后进行染色体鉴定，移栽1个月后对再生植株进行形态学鉴定、气孔鉴定和流式细胞仪鉴定。 |
