以水母、水螅体为代表的多糖含量高的生物RNA的提取方法

摘要

本发明属于分子生物学领域领域，涉及RNA的提取方法，尤其涉及一种以水母水螅体为代表的多糖含量高的生物RNA的提取方法。与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于，本发明通过使用一种区别于一般的trizol和kit等RNA提取方法，增加了SDS粗提过程，有效地防止了后续过程中RNA的共沉淀问题，此外，加入SDS裂解液匀浆后立即加入酚氯仿慢速混匀，在保证酚氯仿抽提效果的同时，可以有效地防止RNA的降解，因而可以适当增加单次RNA提取的样品量，提高效率。同时，本发明得到的RNA，可进行二代转录组测序，且通用性较好，适用于多种多糖含量高的生物样品RNA提取。

主权项

一种水母水螅体为代表的多糖含量高的生物RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：a、取足量SDS裂解液，加入β‑巯基乙醇，混合均匀备用；b、向样品中加入SDS裂解液，裂解后，立即加入酚氯仿，置于旋转混匀器上慢速混匀10min，得到混合液；c、将混合液置于离心机中，在离心机4℃下12000g离心10min～15min，收集上清液；d、向上清液中加入等体积异丙醇，快速混匀后常温下静置10min～15min；e、将静置好的液体置于离心机中，在离心机4℃下12000g离心10min～15min，倒去上清液，收集RNA片；f、用RNase‑free水重悬RNA后，加入trizol混匀后，室温静置3min～5min；g、将f步骤静置好的液体，加入氯仿，快速混匀后室温静置2～3min；h、将g步骤静置好的液体置于离心机中，在离心机4℃下12000g离心10min～15min，收集上清液；i、将所得上清液中加入等体积异丙醇，快速混匀后室温静置5～10min；j、将静置好的液体置于离心机中，在离心机4℃下12000g离心10min～15min，倒掉上清液，收集RNA片；k、用酒精清洗RNA片后，置于离心机中，在离心机4℃下7500g离心5min，倒掉酒精，收集RNA片；l、重复k步骤，倒掉酒精后，收集RNA片，置于离心机中，在离心机4℃下7500g空甩1min，用枪头吸取多余酒精；m、用RNase‑free水重悬，即得到多糖含量高样品的RNA。