一种猪生殖干细胞体外分化精子的建立方法

摘要

本发明公开了一种猪生殖干细胞体外分化精子的建立方法，其包括步骤：仔猪睾丸组织经分离培养，获取原代仔猪睾丸组织成纤维细胞和生殖干细胞；采用构建体外诱导精子分化的“Niche”的培养基培养睾丸组织成纤维细胞15天，得到体外诱导精子分化的“Niche”饲养层；将生殖干细胞接种至“Niche”饲养层上，培养27～30天，经细胞生物学分析，体外获得单倍体精子样细胞。本发明方法操作简单，重复性好，是猪mGSCs体外分化研究的一项重要突破，这项发明对于猪胚胎体外操作和转基因育种研究将提供重要的基础技术，同时对于其他物种精子体外分化和人类辅助生殖的研究也具有重要的参考价值。

主权项

一种构建体外诱导精子分化的“Niche”饲养层的培养基，其特征在于，所述培养基为含12‑15％FBS，55μMβ‑巯基乙醇，1％ITS，1％L‑谷氨酰胺，1％核苷酸，1ng/mL LH，500ng/ml FSH和1％Penicilin‑Stretomycin的DMEM培养基。