一种重组蛋白IE1包被酶标反应板的制备方法及定量检测人血浆HCMV中和抗体试剂盒

摘要

本发明公开了一种重组蛋白IE1包被酶标反应板的制备方法及定量检测人血浆HCMV中和抗体试剂盒，涉及一种新的重组抗原IE1包被酶标反应板的制法，以及在其基础上制备ELISA定量检测人血浆HCMV中和抗体试剂盒。所述方法包括用基因工程方法制备特异性重组HCMV IE1抗原、蛋白纯化、酶标反应板包被以及定量检测人血浆HCMV中和抗体ELISA试剂盒的组装。与其它市售ELISA试剂盒相比，本发明能够高度特异、敏感、快速地检测血浆中具有中和作用的HCMV特异性IgG抗体滴度，检测的结果与微量中和试验的结果高度一致。本发明主要供实验室研究、临床筛查和血制品企业筛选高滴度HCMV静脉注射丙种球蛋白生产原料使用。

主权项

一种ELISA定量检测人血浆HCMV中和抗体试剂盒，其特征在于，试剂盒使用的酶标反应板为重组蛋白IE1包被酶标反应板；所述的重组蛋白IE1包被酶标反应板的制备方法，包括以下步骤：（1）将IE1蛋白抗原用pH为9‑10的碳酸盐缓冲液稀释后包被96孔板，100ng/孔，置湿盒中4℃，22‑24小时，PBST洗板3次，每次2‑4min，然后拍干；（2）每孔加入100 μl含1% BSA和10%小牛血清的PBS，37℃孵育1h ，洗板3次后密封，即得；所述试剂盒由IE1包被酶标反应板、阳性对照血清、标本稀释液、洗涤液、酶标二抗、显色液、终止液构成。