一种改性柚皮载体固定化κ-卡拉胶酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种改性柚皮载体固定化κ-卡拉胶酶的制备方法，步骤如下：1)、柚皮的白色海绵状组织剪切后经酸处理和碱处理除去柚皮中的果胶、半纤维素、木质素等；2)、将预处理后的柚皮经琥珀酸酐改性后引入羧基；3)、取制备的改性柚皮载体，加入κ-卡拉胶酶及一定浓度的戊二醛溶液，混匀后使载体完全浸没在酶液中，在适宜温度下进行吸附交联；交联结束用PBS缓冲液清洗数次，除去未结合的游离酶及戊二醛溶液，得到改性柚皮载体固定化的κ-卡拉胶酶。本发明制备的固定化κ-卡拉胶酶，载体材料来源丰富，廉价易得，无污染，方法及操作简单，具有良好的应用前景。

主权项

一种改性柚皮载体固定化κ‑卡拉胶酶，其特征在于：其制备步骤如下：步骤一：柚皮的预处理：1)、柚子的果皮部分去除外表皮，将中间的白色海绵状部分切至0.2～0.3cm大小的立方体，60℃烘至恒重；2)、将柚皮按1:10(w/v)加入到pH 4的蒸馏水中，持续搅拌3.5h，结束后抽滤，滤渣用蒸馏水洗至中性；3)、将滤渣按固液比1:10加入到质量分数为3％的氢氧化钠溶液中，持续搅拌3.5h，结束后抽滤，滤渣用蒸馏水洗至中性；4)、滤渣用无水乙醇洗涤数次，60℃干燥；步骤二：预处理后的柚皮改性：取预处理后的柚皮，加入琥珀酸酐，吡啶回流24h，结束后用2M的盐酸溶液洗脱数次，再用蒸馏水洗涤数次，干燥得到改性柚皮载体；步骤三：κ‑卡拉胶酶的固定化：取1g改性柚皮载体，加入10mL酶活力为23.6‑236U的κ‑卡拉胶酶液、加入戊二醛，使得戊二醛的质量体积浓度0％‑1.5％，混匀后使载体完全浸没在溶液中，在4‑25℃下吸附交联1‑6h；交联结束后用0.05M pH 7.5的PBS缓冲清洗若干次除去未结合的游离酶及戊二醛，得到固定化κ‑卡拉胶酶。