用于催陈和澄清山西老陈醋的共固定化酶的制备方法

摘要

一种用于催陈和澄清山西老陈醋的共固定化酶的制备方法,包括制备酯化酶酶液、糖化酶酶液，然后取海藻酸钠与黄原胶质量比为5:1制成的载体材料，用其质量55-60倍的50-60℃水溶解，常温下加入一定量的酯化酶液，搅拌均匀后静置，待气泡完全消失后，在4-5℃条件下，缓慢滴入2%的氯化钙水溶液中，固化1h后生成颗粒物，然后用两层纱布滤出颗粒物，用pH3.6的乙酸-乙酸钠缓冲液冲洗颗粒物3~5次，除去表面的氯化钙，吸干表面的水分，制成直径2.0-2.3mm的颗粒状固定化酶；再按固定化酶与糖化酶液质量体积比为1:1、将固定化酶放入糖化酶液中吸附6-7h，然后用纱布滤出颗粒，再用pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲液冲洗颗粒3~5次，除去表面酶液，吸干表面水分，制得共固定化酶。

主权项

一种用于催陈和澄清山西老陈醋的共固定化酶的制备方法,其步骤如下： (1) 制备酯化酶酶液 称取一定质量的酯化酶酶粉，用酯化酶质量4‑5倍、pH 3.6的乙酸‑乙酸钠缓冲液将其溶解，将所得上清液倒入容量瓶，将剩余沉渣中再添入pH 3.6的乙酸‑乙酸钠缓冲液捣研多次，直至全部溶解后将其移入容量瓶中，再用缓冲液稀释到容量瓶刻度，摇匀后多层纱布过滤，制备成浓度为3.5%的酯化酶酶液，备用；(2) 制备糖化酶酶液 称取一定质量的糖化酶酶粉，用糖化酶质量4‑5倍、pH 4.6乙酸‑乙酸钠缓冲液将其溶解，将所得上清液倒入容量瓶，将剩余沉渣中再添入pH 4.6乙酸‑乙酸钠缓冲液捣研多次，直至全部溶解后将其移入容量瓶中，再用缓冲液稀释到容量瓶刻度，摇匀后多层纱布过滤，制备浓度为5%的糖化酶酶液，备用； (3) 称取一定质量的载体材料，用载体材料质量55‑60倍的50‑60 ℃水溶解，然后在常温下加入载体材料质量体积比为100:7的(1)制备的酯化酶液，充分搅拌均匀后静置，待气泡完全消失后，在4‑5 ℃条件下，缓慢滴入2%的氯化钙水溶液中，固化1 h后生成颗粒物，然后在常温下用两层纱布滤出颗粒物，用pH 3.6的乙酸‑乙酸钠缓冲液冲洗颗粒物3~5次，除去表面的氯化钙，吸干表面的水分，制成直径2.0‑2.3 mm的颗粒状固定化酶，备用；(4) 称取(3)制备的一定量固定化酶，按固定化酶与(2)制备的糖化酶液质量体积比为1:1、将固定化酶放入糖化酶液中吸附6‑7 h，然后用纱布滤出颗粒，再用pH 4.6乙酸‑乙酸钠缓冲液冲洗颗粒3~5次，除去表面酶液，吸干表面水分，制得共固定化酶。