稳定表达猪瘟病毒E0-E1-E2蛋白的重组BHK细胞系及其在制备猪瘟疫苗与诊断试剂中的应用

摘要

本发明公开了一种稳定表达猪瘟病毒E0-E1-E2蛋白的重组细胞系及其在制备猪瘟疫苗与诊断试剂中的应用。其中，所述表达猪瘟病毒E0-E1-E2蛋白的重组细胞系为BCSFV-E012，该细胞系保藏在微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.7720。此外，本发明还公开了稳定表达猪瘟病毒E0-E1-E2蛋白细胞系的建立方法以及使用所述细胞系制备预防猪瘟的疫苗组合物的方法，进一步的，本发明还公开了所述重组细胞系表达的E0-E1-E2蛋白在制备预防猪瘟的疫苗及诊断试剂中的应用。采用本发明所述的重组细胞系制备得到的猪瘟疫苗安全性高，免疫效果好，容易大规模生产，不易受外源病毒污染或抗体影响，而且不产生猪瘟病毒非结构蛋白抗体，因此可以对疫苗免疫与病毒感染动物进行鉴别。

主权项

一种用于预防猪瘟的疫苗组合物，其特征在于所述的疫苗组合物中含有经稳定表达猪瘟病毒E0‑E1‑E2蛋白的BHK细胞系表达的猪瘟病毒E0‑E1‑E2蛋白及佐剂，其中所述的E0‑E1‑E2蛋白为病毒样颗粒抗原，所述的猪瘟病毒E0‑E1‑E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述的预防猪瘟的疫苗组合物是通过以下步骤制备得到的：(1)将BHK细胞系BCSFV‑E012正常传代后长至90％满时，换血清体积百分比含量为1～2％的低血清培养基继续培养4‑6d，收获细胞培养上清液存于4℃；(2)细胞上清液经截留分子量为100kD超滤浓缩后调整至E2抗原ELISA效价为1：32至1：64后，按照质量百分比计，加入终浓度为0.02％硫柳汞后为疫苗抗原液；(3)疫苗抗原液与油佐剂按体积比为1：1.5进行混合并充分乳化，即得；其中，所述的BHK细胞系BCSFV‑E012，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.7720。