一种汞离子的超灵敏检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种汞离子的超灵敏检测方法及检测试剂盒。本发明将基于核酸外切酶III介导的信号放大技术与试纸条检测技术相结合，构建一种痕量汞离子的快速检测方法。本方法具有很高的灵敏度，对汞离子的检测限为10pM，检测结果直观，肉眼可见，检测过程方便、迅速，可用于汞离子的实地现场检测；此外，本发明的检测方法具有很好的特异性，常见的其他金属离子对检测不产生影响；构建得到的检测试纸条使用起来省时、省力，检测速度快且操作简单方便，检测结果直观，肉眼可见，不需要使用任何仪器。

主权项

一种汞离子的超灵敏检测方法，包括如下步骤（1）构建茎环结构DNA：所述茎环结构DNA的3’端延伸，凸出在茎环结构外，凸出部分含有T碱基；（2）构建辅助DNA：所述辅助DNA的5’端含有T碱基，在有汞离子存在时能与茎环结构DNA的3’端通过形成T‑Hg²⁺‑T复合物互补，从而打开茎环结构DNA，并形成含有3’平末端的部分互补的双链DNA；（3）将待检样品与茎环结构DNA、辅助DNA混合后，静置反应；（4）往步骤（3）的反应液中加入核酸外切酶III，在有汞离子存在的情况下，茎环结构DNA和辅助DNA通过T‑Hg²⁺‑T复合物互补，形成含有3’平末端的部分互补双链DNA，核酸外切酶III能与部分互补的双链DNA中的3’平末端结合，从而开始切割反应，释放单核苷酸以及汞离子，最后释放出单链DNA，所述单链DNA含有茎环结构DNA的环状区和5’端茎状区；（5）通过检测步骤（4）释放出的单链DNA来判断待检样品中是否含有汞离子；在汞离子存在的情况下，辅助DNA的5’段与茎环结构DNA的3’端的凸出部分及部分茎状区互补，且辅助DNA的3’末端有至少4个碱基不能与茎环结构DNA互补形成平末端。