一种黑痣菌子囊果提取基因组DNA的方法

摘要

本发明公开了一种黑痣菌子囊果提取基因组DNA的方法，与现有技术相比，本发明直接以黑痣菌子囊果为材料，进行DNA提取的方法。在进行DNA提取前，采用裂解液缓冲液处理2次，利用低温下DNA溶解度低的原理去除过多的胶质和多糖，最后加入提取液裂解细胞膜，进行DNA的提取，提取过程中加苯酚-氯仿-异戊醇进行抽提去除多余的蛋白。本方法适用于含有胶质和多糖、蛋白等含量高的较高的真菌材料，此类杂质存在和含量对所抽提到的DNA的产量和质量均无明显的影响，为黑痣菌的后续分子研究提供了保证，具有推广使用的价值。

主权项

一种黑痣菌子囊果提取基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用锋利的刀片将去10‑15个子囊果从寄主植物上取下，尽量不带寄主组织，置于离心管内，加少量的二氧化硅和液氮迅速研磨成粉末状；(2)加入800ul的CTAB‑free缓冲液并迅速混匀，置于冰上10min；4℃，9000r/min离心5min，弃上清，步骤(2)重复两次；(3)加入750ul,65℃预热的CTAB提取缓冲液，充分混匀后置于65℃水浴中1h；(4)将温浴的材料取出置于室温下，待冷却至室温后加入750μl的苯酚‑氯仿‑异戊醇混合液，比例为25:24:1，摇匀3～5min，12000rmp室温离心10min；(5)将上清液转移至一新的1.5ml的离心管中，再加入等体积的氯仿‑异戊醇500‑550μl混合液，摇匀3～5min，12000rmp，室温离心10min；(6)将上清液转移至一新的1.5ml的离心管中，加入350μl的经‑20℃预冷的异丙醇，沉降DNA，充分混匀后，于‑20℃冰箱中静置保存30min；(7)将冷冻保存的离心管取出后置于室温中，待温度至室温后12000rmp室温离心10min，可见底部沉降DNA；(8)弃去上清液，用500μl的70％的乙醇冲洗1‑2次，每次12000rmp室温离心1min后弃上清液，干燥后加入灭菌的蒸馏水；(9)置于‑20℃冰箱中保存备用。