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一种试管树苗的基因组DNA试样的制备方法；其特征是：其步骤为：（1）、 称取0.1‑0.3 g增殖生长30‑40天的试管树苗顶部嫩梢，放入直径为５cm的小研钵中，加入液氮用研杵快速研磨至粉末，加入0.8‑1.0 ml提取液，转移到1.5 ml 离心管中，置于冰上存放，再去研磨第二个样品；所有样品准备好后，在通风厨内向每一离心管内加入8‑10 ul β－巯基乙醇，摇动混合均匀；（2）、在温度为3‑6℃的环境中，在离心力为8000‑12000 g的离心机中运行8‑12分钟；（3）、丢弃上清部分，加入提取液，充分溶解沉淀，重复第2步骤；（4）、重复第3步骤；（5）、在每个离心管中，加入450‑550 ul 提取液使沉淀充分溶解，然后再加入300‑400 ul 高盐CTAB提取液，混匀后，置于温度为６５℃水浴中孵育45‑90分钟；期间摇动几次离心管，即每个离心管为试样Ⅰ；（6）、 在每个含有试样Ⅰ的离心管中加入等体积氯仿，颠倒混合均匀，在温度为3‑6℃的环境中，在离心力为8000‑12000 g的离心机中运行8‑12分钟；（7）、吸取上清物到另一个离心管，再加入等体积氯仿，重复第6步骤；（8）、吸取上清物到一新的离心管，加入２倍体积的100%的乙醇和1/10体积的3M NaAC, 颠倒混匀，在温度为‑18－‑22℃的环境中，放置30分钟或过夜；（9）、在温度为3‑6℃的环境中，在离心力为8000‑12000 g的离心机中运行8‑12分钟；（10）、丢弃上清部分，沉淀用70%‑75%乙醇洗涤2‑3次,然后放到超净工作台上，无菌风吹干，每个离心管内的沉淀为试样Ⅱ；（11）、在每个含有试样Ⅱ的离心管中加50‑100 ul的电导率为３左右的纯净水溶解沉淀，再加入0.5‑1.0 ul RNAase A, 置于温度为37℃水浴中孵育30‑60分钟；（12）、加入等体积氯仿，轻轻颠倒混合均匀，在温度为3‑6℃的环境中，在离心力为8000‑12000 g的离心机中运行8‑12分钟；（13）、 吸取上清物到另一个新离心管，再加入等体积氯仿，重复第12步骤；（14）、吸取上清物到另一个离心管，加入２倍体积的100%乙醇和1/10体积的3M NaAC, 上下颠倒混合均匀，在温度为‑18－‑22℃的环境中，放置至少2小时；（15）、在温度为3‑6℃的环境中，在离心力为8000‑12000 g的离心机中运行8‑12分钟；（16）、丢弃上清部分，沉淀用70%‑75%乙醇洗涤1‑2次,再放到超净工作台上，无菌风吹干，得到的沉淀即为试样Ⅲ；（17）、把纯净水加入到试样Ⅲ中，放到温度为‑18－‑22℃冰箱中保存备用；试管树苗设置为试管梨树苗或试管枣树苗。 |
