一种酿酒酵母整合型表达载体

摘要

本发明公开了一种酿酒酵母整合型表达载体。本发明提供了一种双链DNA片段，自上游至下游依次包括如下元件：酿酒酵母染色体上游同源臂、真核启动子、酿酒酵母的IRES序列、真核筛选基因、真核转录终止序列和酿酒酵母染色体下游同源臂。本发明还保护含有所述双链DNA片段的质粒，即为酿酒酵母整合型表达载体，能够使外源或内源基因在酿酒酵母中表达，并且无需诱导，利用酿酒酵母生产目的蛋白，或用于基因工程菌株的代谢途径构建。本发明的酿酒酵母表达载体为酿酒酵母的蛋白表达和代谢途径构建提供了很好的工具。

主权项

一种双链DNA片段，自上游至下游依次包括如下元件：酿酒酵母染色体上游同源臂、真核启动子、酿酒酵母的IRES序列、真核筛选基因、真核转录终止序列和酿酒酵母染色体下游同源臂；所述酿酒酵母染色体上游同源臂为酿酒酵母染色体上的18SrDNA的上游同源臂，如序列表的序列1自5’末端第675至1007位核苷酸所示；所述真核启动子为酿酒酵母的ILV5基因启动子、酿酒酵母的TDH3基因启动子或酿酒酵母的ADH2基因启动子；所述酿酒酵母的ILV5基因启动子如序列表的序列1自5’末端第1014至1567位核苷酸所示；所述酿酒酵母的TDH3基因启动子如序列表的序列2所示；所述酿酒酵母的ADH2基因启动子如序列表的序列3所示；所述酿酒酵母的IRES序列为酿酒酵母中具有内部核糖体进入位点并具有启动翻译功能的DNA序列，如序列表的序列1自5’末端第2312至2659位核苷酸所示；所述真核筛选基因为酿酒酵母的URA3基因，如序列表的序列1自5’末端第2673至3476位核苷酸所示或如序列表的序列1自5’末端第2673至3473位核苷酸所示；所述真核转录终止序列为酿酒酵母的URA3基因转录终止序列，如序列表的序列1自5’末端第3477至3551位核苷酸所示；所述酿酒酵母染色体下游同源臂为酿酒酵母染色体上的18SrDNA的下游同源臂，如序列表的序列1自5’末端第3558至3921位核苷酸所示。