一种检测猪水泡病毒抗原的酶联免疫试剂盒及定量检测方法

摘要

本发明提供一种定量检测猪水泡病毒抗原的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括猪水泡病毒标准抗原、猪水泡病毒特异性第一抗体、猪水泡病毒特异性第二抗体和酶标抗体。本发明还提供上述酶联免疫试剂盒在定量检测猪水泡病毒抗原中的应用。本发明是蔗糖密度梯度离心、ELISA方法的有机结合体，是集二者之长而去其不足。本发明操作简单、稳定性好、适合于批量样品检测，是抗原定量和疫苗中有效抗原含量检验的理想方法。因此，本发明的方法在SVDV抗原生产、实时监测、疫苗质量评估等方面能够发挥重要作用。

主权项

一种定量检测猪水泡病毒抗原的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括猪水泡病毒标准抗原、猪水泡病毒特异性第一抗体、猪水泡病毒特异性第二抗体和酶标抗体；所述猪水泡病毒标准抗原的制备与赋值：将猪水泡病毒株进行病毒的复壮、繁殖和灭活，得到灭活后的猪水泡病毒抗原，此即为标准抗原，将标准抗原用改进的蔗糖密度梯度离心法进行纯化和定量，得到猪水泡病毒标准抗原的含量；所述改进的蔗糖密度梯度离心法的步骤如下：（1）在灭活的猪水泡病毒抗原中加入等体积的三氯乙烯振摇，离心，取上层水相进行超速离心；（2）将沉淀用缓冲液重悬，加入NP40混匀；（3）将不同浓度的蔗糖按浓度从大到小依次加入到离心管中，平衡以形成密度梯度； （4）取步骤（2）中的重悬液加入到步骤（3）的离心管上层，超速离心，收集梯度液，在波长260nm紫外分光光度仪检测，收取156S峰值处样品，计算出其含量；所述猪水泡病毒特异性第一抗体的制备方法为：将猪水泡病毒抗原用蔗糖密度梯度离心法纯化，调整浓度，加入弗氏完全佐剂乳化，用其免疫兔子，免疫后采血分离血清，得到猪水泡病毒特异性第一抗体；所述猪水泡病毒特异性第二抗体的制备方法为：将猪水泡病毒抗原用蔗糖密度梯度离心法纯化，调整浓度，加入弗氏完全佐剂乳化，用其免疫豚鼠，免疫后采血分离血清，得到猪水泡病毒特异性第二抗体。