一种带鱼指纹图谱的构建方法

摘要

本发明涉及一种带鱼指纹图谱的构建方法，将带鱼制备成供试品溶液，经过高效液相色谱仪奋力检测，获得带鱼的指纹图谱；所述方法包括供试品溶液的制备、高效液相色谱测定、标准指纹图谱的确定。本发明利用HPLC色谱法建立了带鱼的指纹图谱，方法性考察表明该方法可靠、重复性较好，符合指纹图谱的要求；本发明检测带鱼产地的方法操作简单、检测效率高、检测结果可靠性好、快速、精确度高，准确率高达92.7%以上。

主权项

一种带鱼指纹图谱的构建方法，其特征在于，将带鱼制备成供试品溶液，经过高效液相色谱仪检测，获得带鱼的指纹图谱；所述方法包括如下步骤：a）供试品溶液的制备：取不同产地的带鱼样品，以提取溶剂回流提取，离心，取上清液加在碱性氧化铝层析柱上，收集过柱液，再以水洗脱，合并过柱液及水洗脱液，过滤，作为供试品溶液；b）高效液相色谱测定：吸取步骤a）得到的供试品溶液至高效液相色谱仪测定，得到不同产地的带鱼指纹图谱；高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18柱，5μm，4.6 mm×250 mm；流动相：A相为0.05‑0.07%的乙酸丁酯或0.2‑0.5%的乙二醇，B相为0.2%磷酸二氢钾溶液；检测波长210‑320nm，柱温为38‑40℃，流速：1.1‑1.5mL/min；c）标准指纹图谱的确定：测定了5个不同产地的带鱼共28个带鱼样品高效液相色谱指纹图谱并进行比较，得到由其共有峰构成的带鱼样品高效液相色谱指纹图谱，该指纹图谱具有的共有特征峰有13个与7个特征峰；步骤a）中带鱼样品选择体表富有光泽、腮呈鲜红、粘液透明、眼球饱满、角膜清晰的带鱼，取1.5‑5.0g带鱼背部肌肉样品在0到‑10℃下干燥12‑18h，备用；然后加入5‑6倍带鱼质量的去离子水搅拌均与得到带鱼肉浆，用带鱼质量的0.36‑0.97%的内切蛋白酶与鱼肉浆质量的0.2‑0.33%的壳聚糖，35‑40℃下搅拌30‑240min，pH为5.5‑8.5；搅拌结束后，调节pH至10‑11.2，保持30‑45min后将pH调节至中性，然后4000rpm下离心，取上清液，将上清液完全干燥后得到带鱼样品固体，将带鱼样品固体加入至提取溶剂中回流提取，离心，取上清液加在碱性氧化铝层析柱上，收集过柱液，再以水洗脱，合并过柱液及水洗脱液，过滤，作为供试品溶液；其中，过滤的孔径为0.22‑0.43μm；其中，流动相洗脱程序为：时间（min）       A相    B相0               5      955               12     9010              29     7316              36     6724              59     5131              83     1641              89     1054              97      460              100     0。