一种山楂中黄酮成分的荧光检测方法

摘要

本发明提供了一种山楂中黄酮成分的荧光检测方法：先用甲醇提取山楂得到山楂提取液，稀释后作为样品液，进行毛细管电泳荧光检测，毛细管柱中填充微乳缓冲溶液，所述微乳缓冲溶液的成分为：两性离子表面活性剂3～12mg/mL、助表面活性剂55～70mg/mL、乙酸乙酯4.5～6mg/mL、2.5～10mmol/L的缓冲盐、pH值为8～10。然后根据对照品的标准曲线计算得到山楂中各黄酮成分的含量。本发明针对现有色谱技术的不足，提供了一种制备简单、溶解能力好、粘度低、稳定性好的微乳缓冲液，并在缓冲液中创新使用中性两性离子表面活性剂；同时，本发明优先使用灵敏度高、重复性好的发光二极管诱导荧光检测器，并在黄酮检测方面取得了显著的效果。

主权项

一种山楂中黄酮成分的荧光检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)山楂粉末加入甲醇溶剂，甲醇的体积用量以山楂粉末的质量计为10～30mL/g，称定重量为M，密闭后加热超声提取30～60分钟，冷却后加入甲醇补足至重量M，混匀后用0.22μm规格的有机膜过滤，离心，取续滤液制得山楂提取液；(2)取步骤(1)所得山楂提取液，用甲醇稀释10～15体积倍后作为样品液进样，进行毛细管电泳荧光检测，毛细管柱中填充微乳缓冲溶液，所述微乳缓冲溶液的成分为：两性离子表面活性剂3～12mg/mL、助表面活性剂55～70mg/mL、乙酸乙酯4.5～6mg/mL、2.5～10mmol/L的缓冲盐、pH值为9，25～30℃下超声20～30分钟，过滤、制得微乳缓冲溶液；以发光二极管光诱导荧光检测器进行检测，检测波长480nm，得到样品液的毛细管电泳荧光光谱图；所述两性离子表面活性剂为3‑磺丙基十二烷基二甲基甜菜碱、3‑磺丙基十四烷基二甲基甜菜碱或3‑磺丙基十六烷基二甲基甜菜碱；所述助表面活性剂为正丁醇；所述缓冲盐为tris或硼砂；(3)以山奈素的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照步骤(2)同样条件进行毛细管电泳色谱检测，获得山奈素对照品的毛细管电泳荧光光谱图，以山奈素对照品的摩尔浓度为横坐标，以山奈素对照品溶液的毛细管电泳荧光光谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作山奈素标准曲线，按同样方法制作芹菜素标准曲线、槲皮素标准曲线、异牡荆素标准曲线、牡荆素标准曲线、异槲皮素标准曲线、金丝桃苷标准曲线；根据样品液的毛细管电泳荧光光谱图中相应色谱峰的峰面积及各个标准品的标准曲线计算样品液中山奈素、芹菜素、槲皮素、异牡荆素、牡荆素、异槲皮素、金丝桃苷含量，相应换算得到山楂中山奈素、芹菜素、槲皮素、异牡荆素、牡荆素、异槲皮素、金丝桃苷含量。