新型腔肠素底物及其使用方法

摘要

一种编码修饰的荧光素酶多肽和底物的分离的多核苷酸。OgLuc变体多肽与SEQ ID NO:1具有至少60%氨基酸序列同一性且在对应于SEQ ID NO:1中的氨基酸的位置处具有至少一个氨基酸置换。OgLuc变体多肽相对于野生型刺虾属荧光素酶的对应的多肽具有增强的发光、增强的信号稳定性和增强的蛋白质稳定性中的至少一项。

主权项

一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码与SEQ ID NO:1具有至少70％氨基酸序列同一性的发光多肽，其中所述变体多肽包含相对于SEQ ID NO:1的氨基酸置换A4E、Q11R、A33K、V44I、A54F、P115E、Q124K、Y138I和N166R，且其中所述变体多肽包含至少一个额外的相对于SEQ ID NO:1的氨基酸置换，所述至少一个额外的相对于SEQ ID NO:1的氨基酸置换选自：Q18L；L92H；L92M；L92Y；Y109F；F77Y；F77S；F77T；F77V；F77A；F77G；F77C；F77D；F77M；Q20R、L92H和F77C；F54I和F77C；Q20R、F54I和F77C；Q20R和F54I；F54I、F77C和L92H；Q20R、F54I、F77C和L92H；Q20R和Yl09F；L92H和Yl09F；F54I、L92H和Yl09F；F54I和Yl09F；Q18L、L92H和Yl09F；Q18L、F54I、L92H和Yl09F；Q18L、F54I、L92H、Yl09F、P113T、V127A和K136M；Q20R、F54I、L72Q、K89E和C146S；F54I、L72Q、K89E和C146S；F54I和C146S；Q18L和Y109F；Q18L和F54I；Q18L、F54I和Y109F；Q18L、I59T、Y109F、P113T、V127A和K136M；F54I、K89E和C164S；Q20R、F54I、L27Q和K89E；Q20R、F54I、L27Q和C146S；Q20R、F77C、I90V、L92H和V127A；Q20R、G71D、F77C、I90V、L92H和V127A；Q20R、G71D、F77C、L92H和V127A；F54I、G71D、F77C、L92H和V127A；F54I、G71D、F77C、I90V和L92H；F54I、G71D、F77C、I90V、L92H和V127A；Q20R、F54I、G71D、F77C、I90V、L92H和V127A；G71D、I90V、L92H、Y109F和L127A；G71D、L92H、Y109F和L127A；Q20R、F54I、G71D、F77C、I90V、L92H和V127A；Q18L、G71D、F77Y、I90V、L92H、Y109F和V127A；Q18L、F54I、G71D、F77Y、I90V、L92H、Y109F和V127A；G71D、F77C、I90V、L92H和V127A；G71D、F77C、I90V和V127A；Q20R、G71D、F77C和L92H；F54I、G71D、F77C和L92H；Q20R、F54I、G71D、F77C、L92H和V127A；I90V、L92H、Y109F和V127A；F54I、I90V、L92H、Y109F和V127A；F54I、G71D、I90V、L92H和Y109F；Q18L、G71D、F77Y、L92H、Y109F和V127A；Q18L、F77Y、I90V、L92H、Y109F和V127A；Q18L、F54I、F77Y、I90V、L92H、Y109F和V127A；Q18L、F54I、I90V、L92H、Y109F和V127A；Q18L、F54I、G71D、F77Y、L92H、Y109F和V127A；G71D和F77C；I90V和Y109F；F68Y、L72Q、M75K和V158I；I90T和H92R；F68Y、L72Q、M75K、V158I、I90T和H92R；V21L、I76F、I90T和H92R；V21L和I76F；V21L、F68Y、L72Q、M75K和I90T；V21L、I76F和H92R；V21L、F68Y、L72Q、M75K、H92R和I90T；V21L、F68Y、L72Q、M75K、I76F、I90T、H92R和V158I；F68Y、L72Q、M75K和H92R；V21L和H92R；F68Y、L72Q、M75K、H92R和V158I；V21L、F68Y、L72Q、M75K、I90T、H92R和V158I；V21L、I90T和I76F；V21L、F68Y、L72Q、M75K、I76F和V158I；L22F；V36E；V36M；I76F；T128A；T128A和T154S；N135Y和R152H；L18I和P145Q；L18V和I99T；G67D和T159I；L46Q、G51R和I138S；G51V、R112C和P113H；F54I、I90V和F77Y；F1I、L27V和V38I；F1I和V38I；F1I和L27V；L27V；M75K、L72Q、F68Y和Q18L；M75K、L72Q、F68Y、L27V、Q18L和V38I；F1I、M75K、L72Q、F68Y、L27V和V38I；K33N；F1I、M75K、L72Q、F68Y、K33N和V102E；E4K、M75K、L72Q、F68Y和K33N；F1I、M75K、L72Q、M70V和Q18L；Q18L、F68Y、L72A和M75K；Q18L、F68Y、L72G和M75K；Q18L、F68Y、L72N和M75K；Q18L、F68Y、L72R和M75K；Q18L、F68Y、L72M和M75K；Q18K、F68Y、L72Q和M75K；Q18D、F68Y、L72Q和M75K；Q18F、F68Y、L72Q和M75K；Q18W、F68Y、L72Q和M75K；Q18H、F68Y、L72Q和M75K；Q18R、F68Y、L72Q和M75K；Q18M、F68Y、L72Q和M75K；Q18N、F68Y、L72Q和M75K；Q18P、F68Y、L72Q和M75K；Q18L、L19S、F68W、L72Q和M75K；Q18L、F68Y、L72W和M75K；Q18L、F68Y、L72Y和M75K；Q18L、F68Y、L72F和M75K；Q18L、F68Y、L72V和M75K；Q18L、F68Y、L72I和M75K；Q18L、F68Y、L72T和M75K；Q18L、F68Y、L72N和M75K；Q18L、F68Y、L72R和M75K；Q18L、F68Y、L72P和M75K；Q18L、F68Y、L72G和M75K；Q18L、F68Y、L72A和M75K；Q18L、F68Y、L72M和M75K；Q18L、F68Y、L72C和M75K；Q18L、F68Y、L72H和M75K；Q18L、F68Y、L72S和M75K；Q18L、F68Y、L72Q和M75F；Q18L、F68Y、L72Q、I90R和M75K；Q18L、F68Y、L72Q、I90Y和M75K；Q18L、F68Y、L72Q、I90D和M75K；Q18L、F68Y、L72Q、I90P和M75K；Q18L、F68Y、L72Q、I90K和M75K；Q18L、F68Y、L72Q、I90Q和M75K；Q18L、K33N、F68Y、L72Q和M75K；Q18L、K33N、F68Y、L72Q、170G和M75K；Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、T39T、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、K43R、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、T39T、K43R、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、K43R、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、K43R、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、S66N、K43R、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、T39T、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、T39T、K43R、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、T39T、K43R、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、T39T、K43R、S66N、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、K43R、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、K43R、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；K33N、L27V、Y68D、Q18L、F68Y、L72Q和M75K；和K33N、L27V、K43R、S66N、Q18L、F68Y、L72Q和M75K，其中所述发光多肽相对于SEQ ID NO:3具有增强的发光。