基于固定化酶原位高效酶解法的蛋白鉴定及质谱成像的方法

摘要

本发明属生化分析领域，涉及一种固定化酶原位酶解组织切片实现蛋白鉴定并应用于质谱成像的新方法。本发明利用表面具有羟基羧基等亲水基团的氧化石墨烯固定胰蛋白酶，通过提高酶解效率，实现组织切片上蛋白质的原位高效酶解及鉴定，并将其应用于质谱成像技术，确定了切片中蛋白质的分布。本发明所选用的载体材料氧化石墨烯具有极强的吸附能力，可在短时间内吸附胰蛋白酶，利用限域效应极大提高了胰蛋白酶的酶解效率，有效促进了组织切片原位酶解及蛋白的鉴定。本发明具有步骤简单、操作方便、快速高效等特点，可广泛用于蛋白质组学相关领域。

主权项

一种基于固定化酶原位高效酶解法的蛋白鉴定及质谱成像的方法，其特征是，选用纳米材料作为胰蛋白酶吸附剂，利用其高效的酶解效率实现组织切片原位酶解及蛋白鉴定并应用于质谱成像，其包括步骤：(1)将离体的组织切片用导电胶带固定于质谱靶板上；(2)依次用不同浓度的乙醇溶液润洗切片表面，每次润洗一分钟；(3)将胰蛋白酶与氧化石墨烯材料在磷酸缓冲溶液中混合，4摄氏度条件下孵育；(4)将固定化酶用25mM碳酸氢铵溶液稀释后均匀铺展在组织切片上，并放入37摄氏度恒温箱，至组织切片表面的溶液完全蒸发；(5)配制含三氟乙酸和乙腈水溶液配制成CHCA基质溶液，用基质覆盖仪将基质溶液均匀喷洒在组织切片上，待基质完全干燥后送入质谱仪进行成像分析；(6)将扫描结果导入成像软件中，通过图像重构技术处理，选择合适的肽段得到组织切片中蛋白分布的质谱成像图。