发明名称 |
一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用 |
摘要 |
本发明公开了一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用,属于疾病的诊断和检测技术领域。本发明一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒,包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品;其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。使用本发明的方法分别对PCT单克隆抗体和PCT多克隆抗体进行标记后,得到的大粒径胶乳可以提高检测灵敏度,小粒径胶乳可以拓宽线性范围,因此,本发明的复合胶乳制剂既可以提高检测灵敏度,又可拓宽检测线性范围,对降钙素原的检测来说具有检测快速、敏感度高、特异性强和准确性好等优点。 |
申请公布号 |
CN104237525B |
申请公布日期 |
2016.04.13 |
申请号 |
CN201310253612.7 |
申请日期 |
2013.06.24 |
申请人 |
北京美康生物技术研究中心有限责任公司 |
发明人 |
金鑫;曾滨 |
分类号 |
G01N33/68(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I;G01N21/82(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
代理机构 |
北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 |
代理人 |
孙皓晨;费碧华 |
主权项 |
一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒,其特征在于所述的试剂盒包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品;其中,所述的稀释液为含有2M NaCl,2%w/w PEG20000,0.5%w/w BSA,0.1%w/w proclin‑300的0.05M Tris‑HCl缓冲液,pH=8.4;其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳;所述的胶乳制剂是按照以下方法制备得到的:(1)羧基化的聚苯乙烯胶乳活化10mg/ml的羧基化的聚苯乙烯胶乳1ml中加入50mM,pH 6.1MES溶解的1mg EDC(1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐)和10mgNHS(N‑羟基琥珀酰亚胺)混匀活化60分钟,离心8000rpm弃去上清,沉淀用pH 7.4的50mM PBS重悬;按照上述方法分别制备得到了粒径为76nm和187nm活化后的羧基化的聚苯乙烯胶乳;(2)偶联了PCT单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备将1mg PCT单克隆抗体加入2ml浓度为10mg/ml的粒径为76nm的胶乳溶液中,室温混匀2‑4小时,2‑8℃8000rpm离心15min,收集上清液备用,加入含有5mg BSA的50mM PBS,室温混匀1‑2小时;2‑8℃8000rpm离心15min,弃掉上清液,沉淀中加入5ml 50mM的甘氨酸,充分混匀30min;2‑8℃8000rpm离心15min,弃掉上清液,沉淀使用5ml Tris‑HCl缓冲液复融胶乳;(3)偶联了PCT多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备将0.5mg PCT多克隆抗体加入2ml浓度为10mg/ml的粒径为187nm的胶乳溶液中,室温混匀2-4小时,2‑8℃8000rpm离心15min,收集上清液备用,加入含有2.5mgBSA的50mM PBS,室温混匀1‑2小时;2‑8℃8000rpm离心15min,弃掉上清液,沉淀中加入5ml 50mM的甘氨酸,充分混匀30min;2‑8℃8000rpm离心15min,弃掉上清液,沉淀使用5ml Tris‑HCl缓冲液复融胶乳;(4)将两种胶乳溶液进行体积比1:1混合,充分混匀后备用;其中,步骤(2)或步骤(3)中所述的Tris‑HCl缓冲液为含有1%w/w BSA,0.05%v/v吐温,0.1%w/w海藻糖、0.1g/L羧甲基纤维素钠,0.1%w/w NaN<sub>3</sub>的0.05M Tris‑HCl缓冲液,pH=7.4。 |
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