检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被酶标板、阴性对照血清、阳性对照血清、酶标二抗、浓缩洗涤液、样品稀释液、显色液和终止液，包被酶标板以重组蛋白Nh作为包被抗原。研究及实践证明，本发明具有特异性强、敏感度高、操作简单等特点，易于大范围推广使用，具有广阔的市场前景，可用于流行性腹泻感染情况的血清学调查、抗体监测及疫苗免疫效果的评估等方面。

主权项

一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被酶标板、阴性对照血清、阳性对照血清、酶标二抗、浓缩洗涤液、样品稀释液、显色液和终止液，其特征在于：所述包被酶标板以重组蛋白Nh作为包被抗原,所述重组蛋白Nh具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列或由具有序列表SEQ.ID.No.2的碱基序列的基因编码；所述重组蛋白Nh按以下操作制备：以猪流行性腹泻病毒流行毒株为材料，通过RT‑PCR扩增N基因内部主要亲水区序列135‑319位氨基酸，并获得重组质粒pMD‑Nh；再将Nh片段亚克隆到表达载体pET‑32a(+)中获得原核表达质粒pET32a‑Nh；将原核表达质粒pET32a‑Nh转化进宿主表达菌BL‑21(DE3)中，经IPTG诱导表达获得重组蛋白Nh；利用Ni²⁺亲和层析法纯化获到具有生物学活性的重组蛋白Nh。