一种羧甲基赖氨酸的检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种羧甲基赖氨酸(CML)的检测方法，其特征是结合HILIC亲水作用色谱柱在较高有机相比例下对强极性CML的分离，采用高效液相色谱-串联质谱法测定食品中CML含量。粉碎的食品经硼氢化钠还原、盐酸水解后，过MCX阳离子交换小柱萃取净化，样品溶液在HILIC色谱柱中以甲醇-水(均含2mM乙酸铵和0.1％甲酸)为流动相进行梯度洗脱，CML与样品基质分离。选用电喷雾离子源，正离子扫描，多反应监测模式，进行串联质谱分析。以D4-CML为内标物定量分析，分析时间为12min。CML在保留时间3.47min处具有吸收峰。此种新的检测方法灵敏度高、准确度高、精密度好，无需对样品进行衍生化，简化了样品前处理、缩短了检测时间、节省了检测成本。

主权项

一种羧甲基赖氨酸的检测方法，其特征在于包括如下步骤：称取一定质量的待测样品，任选的包括样品粉碎的步骤；样品在硼酸钠缓冲溶液中经硼氢化钠还原；然后用体积比为1‑3∶1三氯甲烷‑甲醇混合液去除脂肪并沉淀蛋白质；沉淀物经盐酸水解后，添加一定量的氘代羧甲基赖氨酸，过MCX阳离子交换小柱萃取净化；萃取液经氮吹浓缩后重新溶解在一定体积的体积比为3‑5∶1甲醇‑水溶液中，得到待测液；待测液在HILIC色谱柱中以均含1‑3mM乙酸铵和0.05‑0.15％甲酸的甲醇A‑水B为流动相进行梯度洗脱，氘代羧甲基赖氨酸和羧甲基赖氨酸通过洗脱与样品基质分离；梯度洗脱参数为0～3min，80％～50％A；3～6min，50％A；6.1min，80％A；6.1～12min，80％A；选用电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描，多反应监测模式(MRM)，对所分离的洗脱样品进行串联质谱分析，测定质谱图中羧甲基赖氨酸特征峰与相对应的氘代羧甲基赖氨酸的特征峰的高度之比，通过高度之比和所加入的氘代羧甲基赖氨酸的量计算待测样品中羧甲基赖氨酸的浓度。