6聋病易感基因位点分型／突变比例检测试剂盒

摘要

本发明公开了6聋病易感基因位点分型／突变比例检测试剂盒，该试剂盒包括扩增试剂和一系列标准品；所述扩增试剂包括：PCR缓冲液、MgCl₂和dNTPs的反应混合物，Taq酶，超纯水，高特异性扩增GJB2，SLC26A4，线粒体12SrDNA的引物混合物，所述一系列标准品包括：235delC、299delAT、2168A>G、IVS7-2A>G分型标准品和1494C>T突变比例标准品、1555A>G突变比例标准品。本发明首次利用荧光定量PCR检测的方法实现了1494C>T、1555A>G的突变比例报告和四通道／四色染料实现6位点分型检测的目标。

主权项

一种6聋病易感基因位点分型/突变比例检测试剂盒，其特征在于包括扩增试剂和一系列标准品；所述扩增试剂包括：PCR缓冲液、MgCl₂和dNTPs的反应混合物，Taq酶，超纯水，高特异性扩增GJB2：235delC、299delAT，SLC26A4：2168A＞G、IVS7‑2A＞G，线粒体12SrDNA：1494C＞T、1555A＞G的引物混合物，对上述位点进行特异性检测的探针混合物，对人基因组DNA进行检测的通用探针混合物；所述一系列标准品包括：235delC分型标准品、299delAT分型标准品、2168A＞G分型标准品、IVS7‑2A＞G分型标准品、1494C＞T突变比例标准品、1555A＞G突变比例标准品；其中，用于GJB2：235delC、299delAT，SLC26A4：2168A＞G、IVS7‑2A＞G，线粒体12SrDNA：1494C＞T、1555A＞G检测的引物为：SEQ NO.1：5’‑GTAAGTTGGGTGCTTTGTGTTAAG‑3’SEQ NO.2：5’‑GCCCTGAAGCGCGTACA‑3’；SEQ NO.3：5’‑TGGGATGGATTTAACAATGCC‑3’SEQ NO.4：5’‑GTTAGAAAGTTCAGCATTATTTGGTTG‑3’；SEQ NO.5：5’‑AATGGAACCTTGACCCTCTTGA‑3’SEQ NO.6：5’‑TGTGAIAGAAAAGCTGGAGCAATG‑3’；SEQ NO.7：5’‑ACGTGTGCTACGATCACTACTTCC‑3’SEQ NO.8：5’‑CTCCTCGATGTCCTTAAATTCACTC‑3’；用于线粒体12SrDNA1555A＞G突变检测的探针为：SEQ NO.9：5’‑AGTACACTTACCATGTTACGACTTGCCTCCTC‑3’用于线粒体12SrDNA1494C＞T突变检测的探针为：SEQ NO.10：5’‑GTGAAGTAIACTTGAGGAGaGTGACGGGAC‑3’；用于GJB2：235delC、299delAT，SLC26A4：2168A＞G、IVS7‑2A＞G突变检测的探针为：SEQ NO.11：5’‑AAATGGCAGTAGCAATTATCGTCCGAA‑3’SEQ NO.12：5’‑CTTGGTTCTGTAGAIAGAGTATAGCATCACGGAC‑3’；SEQ NO.13：5’‑ACATCCGGCTATGGGCCTGC‑3’SEQ NO.14：5’‑CCTTGATGAACTTCCTCTTCTTCTCGTCTC‑3’；用于对人基因组DNA进行检测的通用探针为：SEQ NO.15：5’‑GAATGTGTCCTTTCTAATGTTGTCGTC‑3’；其中LNA核苷以黑体字表示；所述的用于GJB2：235delC、299delAT，SLC26A4；2168A＞G、IVS7‑2A＞G，线粒体12SrDNA：1494C＞T、1555A＞G突变检测的探针，每条探针的5’端和3’端均进行荧光染料标记，其中5’端为发光基团，3’端为淬灭基团。