一种药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法

摘要

本发明公开一种药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法，所述方法为：以人参皂苷Rg₁和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷，取人参皂苷Rg₁对照品加甲醇溶解制成对照品溶液制备；绘制标准曲线；将药物组合物注射液注入固相萃取柱，洗脱，蒸干，溶解制成供试品溶液；依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）计，不得少于0.30mg。本发明为药物注射液总皂苷的含量测定方法提供了快速、准确的方法。

主权项

一种药物组合物注射液的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下以人参皂苷Rg₁和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法：A.以人参皂苷Rg₁测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为：对照品溶液制备，取人参皂苷Rg₁对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg₁ 0.5‑2mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl，置试管中，氮气吹干，加入3％‑7％的香草醛冰醋酸溶液0.1‑0.4ml、高氯酸0.6‑1.0ml，混匀，50‑70℃水浴加热10‑20分钟，取出，加入冰醋酸3‑7ml，混匀，置冰浴冷却1‑2分钟，以相应的试剂作空白，照紫外‑可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rg₁含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C‑18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水7‑13ml，0.5％‑2％乙酸溶液10‑20ml，水10‑20ml，5％‑20％甲醇溶液7‑13ml，75％‑85％甲醇溶液10‑20ml，洗脱，取75％‑85％甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μl，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg₁的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg₁C₄₂H₇₂O₁₄计，不得少于0.30mg；B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为：精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.9‑1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C‑18，500mg固相萃取柱，依次采用水8‑12ml，0.8％‑1.2％乙酸‑水13‑18ml，水13‑18ml，8％‑12％甲醇‑水8‑12ml，75％‑85％甲醇‑水13‑18ml，洗脱；将75％‑85％甲醇‑水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL，置于试管中,氮气吹干，加入4.5％‑5.5％的香草醛冰醋酸溶液0.1‑0.3ml，高氯酸0.6‑1.0ml混匀，于60℃进行显色反应12‑17min，加入冰醋酸3‑7ml，混匀，冰浴冷却，0.5‑1.5min；以相应试剂作空白，按照中国药典2010年版一部附录ⅤA紫外‑可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200μL，置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，不得少于0.30mg；药物组合物注射液由如下方法制成：黄芪25～35重量份、人参8～12重量份、苦参素0.5～1.5重量份；以上三味药，人参用60～80％的乙醇，回流提取1～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75％，用氢氧化钠调pH值至6～7，静置10～18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65℃1.10～1.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85％，用氢氧化钠调值pH至6～7，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到40体积份，用氢氧化钠调pH值至6～7，100℃灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调pH值至6～7，加活性炭，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调pH值至6～7，100～120℃灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得；其中所述重量份与所述体积份的关系为克与毫升的关系。