一种单克隆抗体的制备方法

摘要

一种单克隆抗体的制备方法属于抗体的制备方法技术领域，尤其涉及一种单克隆抗体的制备方法。本发明提供一种高效、产品质量高的单克隆抗体的制备方法。本发明包括以下步骤。1、以一定温度保存的BL21-pET-32a/SAG1菌液在含Amp+的LB琼脂平板中划线培养，后挑取单菌落接种液体LB培养基中，摇床250rpm振荡培养；以碱法抽取质粒，并以质粒DNA作为模板进行PCR鉴定和双酶切鉴定。

主权项

一种单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）以一定温度保存的BL21‑pET‑32a/SAG1菌液在含Amp+的LB琼脂平板中划线培养，后挑取单菌落接种液体LB培养基中，摇床250 rpm振荡培养；以碱法抽取质粒，并以质粒DNA作为模板进行PCR鉴定和双酶切鉴定；2）无菌tip取pET‑32a/SAG1质粒加到BL21感受态细胞中，混匀，冰上放置30 min；42 ℃热激90 s，迅速置冰上2 min，加入1 ml 液体LB培养基，37 ℃振荡培养45 min，5000 rpm、4 ℃离心3 min，吸去上清约1 ml，管底液体悬浮菌，在无菌条件下涂布于含Amp+抗性的LB平板，37 ℃培养至长出菌落为止；3）酶切和PCR鉴定后的pET‑32a/SAG1转化表达菌株E. coli BL21感受态；涂于含有Amp+抗性的LB平板，挑选重组单克隆菌落，转接入含LB的锥形瓶中，37 ℃、250 rpm振荡培养；待培养4 h时，迅速加入终浓度为IPTG诱导剂，振荡培养，分别取2、3、4、5、6、7、8h的培养样品1 mL高速离心，所得沉淀用于SDS‑PAGE和western bolt。