一种制备胰凝乳蛋白酶的方法

摘要

本发明公开了一种制备胰凝乳蛋白酶的方法。本发明的技术方案是将动物胰脏经过绞碎，灵活运用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸缓冲液盐溶、硫酸铵盐析等现代蛋白纯化技术，制备胰凝乳蛋白酶。本发明操作简单、成本低，非常适用于规模化大生产。

主权项

一种制备胰凝乳蛋白酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1） 水解：将新鲜或冷冻动物胰脏绞碎置于容器中，加入丙酮搅拌脱水，离心得沉淀物，加入水及胰酶搅拌溶解，用氢氧化钠溶液调至pH值，保温搅拌，再加入硅藻土充分搅拌，过滤；（2）沉淀：收集滤液，加入丙酮搅匀，静置，虹吸弃去上层丙酮清液，然后用丙酮洗涤沉淀物，过滤甩干，干燥；得胰凝乳蛋白酶粗品；（3）提纯：将粗品用磷酸缓冲液溶解，搅拌混合，静置，然后加入硅藻土拌匀，过滤；往滤液中加入硫酸铵，过滤后可得盐析物；将盐析物再溶于碳酸缓冲液，然后在搅拌下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，静置，过滤；（4）滤取晶体并用水冲洗，冷冻干燥，即可得胰凝乳蛋白酶。