一种利用外周血检测结核分枝杆菌感染的试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种利用外周血检测结核分枝杆菌感染的试剂盒。本发明所提供的试剂盒含有如下物质：1）结核分枝杆菌Rv3615c混合多肽肽库；所述结核分枝杆菌Rv3615c混合多肽肽库由序列表中序列1-19所示氨基酸序列组成的19条多肽中的全部或部分组成；2）经荧光染料A标记的抗CD3的抗体；3）经荧光染料B标记的抗γ-干扰素的抗体；4）高尔基体阻断剂；所述荧光染料A和所述荧光染料B所发荧光颜色不同。本发明提供了一种新的可用于结核分枝杆菌感染检测的方法，实验证明，本发明可直接利用外周血进行抗原刺激，无需分离外周血单个核细胞，实验数据显示用于结核分枝杆菌感染检测具有较高的灵敏度和特异性，且操作简便，成本较低，具有较高的临床应用价值。

主权项

一种检测外周血中是否含有结核分枝杆菌特异性T细胞的非疾病诊断治疗性方法，包括如下步骤：(a)向离体的待测外周血中加入结核分枝杆菌Rv3615c混合多肽肽库，37℃孵育14‑18h；所述结核分枝杆菌Rv3615c混合多肽肽库由序列表中序列1‑19所示氨基酸序列组成的19条多肽中的全部或部分组成；(b)向步骤(a)的体系中加入高尔基体阻断剂，37℃孵育4‑6h；(c)将步骤(b)的体系离心后，向沉淀中加入细胞固定液，避光反应15‑25min，再加入通透缓冲液；(d)向步骤(c)的体系中加入经荧光染料A标记的抗CD3的抗体和经荧光染料B标记的抗γ‑干扰素的抗体，避光反应20‑30min；(e)将步骤(d)的体系离心，取细胞沉淀，加入染色缓冲液，进行流式细胞检测；(f)结果判断：若经所述流式细胞仪检测，双阳性细胞的比例大于0.2％，且为空白对照组中双阳性细胞比例的两倍以上，则所述待测外周血中含有或候选含有结核分枝杆菌特异性T细胞；反之，则所述待测外周血中不含有或候选不含有结核分枝杆菌特异性T细胞；所述空白对照组为：与如上步骤(a)‑(f)相比，仅缺少步骤(a)中所述“向离体的待测外周血中加入结核分枝杆菌Rv3615c混合多肽肽库”的步骤；所述双阳性细胞为被如下两种抗体同时标记的细胞：所述经荧光染料标记的抗CD3的抗体和所述荧光染料标记的抗γ‑干扰素的抗体。