一种天然竹叶提取物抗菌剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种天然竹叶提取物抗菌剂的制备方法，属于抗菌剂制备领域。该方法是以新鲜毛竹叶为原料，通过剔除发黄以及腐烂的竹叶，干燥粉碎后溶于磷酸缓冲液，冰水浴下磁力搅拌得竹叶浆，之后高速离心得上清液，用硫酸铵盐析得粗抗菌蛋白肽，再通过透析最终制得一种天然竹叶提取物抗菌剂。本发明所采用的原料属于天然植物的树叶，为可再生资源，且资源保有量大，生产成本低，制备步骤简单易操作，竹叶中含有多种天然化合物，具有很好的抑菌效果，且不会对待保存的食品风味产生影响，抑菌效果明显高于普通化学抗菌剂。

主权项

一种从天然竹叶中提取抗菌剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）选取新鲜毛竹叶，分捡去除其中腐烂、发黄的叶片，用去离子水冲洗叶片表面3～5次，去除叶片表面浮灰，之后放入恒温干燥器，在30～40℃下干燥3～4h，干燥后将其放入气流粉碎机中，粉碎成1～1.5cm的碎片，备用；（2）称取71.6g磷酸氢二钠和31.2g磷酸二氢钠分别溶于1000mL蒸馏水中，配制成磷酸缓冲液母液，之后量取51mL磷酸二氢钠母液和49mL磷酸氢二钠母液倒入200mL烧杯中搅拌均匀，配制成pH为6.8的磷酸缓冲溶液；（3）将干燥后的竹叶碎片和磷酸缓冲溶液按固液比为1:15～1:17加入到1000mL烧杯中，再加入1～2g纤维素酶，移入冰水浴锅内，保持温度在4～6℃之间，放置在磁力搅拌机上，以300～400r/min的转速搅拌12～24h，得到竹叶浆；（4）将上述制得的竹叶浆放入高速冷冻离心机，以8000～9000r/min的转速冷冻离心处理10～15min，分离去除沉淀物得到上清液；（5）量取200～300mL上述分离得到的上清液，用慢速搅拌机以100～150r/min的转速缓慢搅拌，在搅拌的状态下分5～7次加入30～60g硫酸铵粉末，在40～50min内加完，之后提高转速至300～400r/min继续搅拌10～15min，放入冷冻箱，在4～6℃下静置30～40min，使沉淀充分析出；（6）将上述盐析出沉淀的溶液放入高速冷冻离心机，在4～5℃下以10000～11000r/min的转速离心处理30～40min，分离去除上清液得到沉淀，将得到的沉淀用等体积上述制得的磷酸缓冲溶液溶解，即得粗竹叶抗菌蛋白肽；（7）将透析袋用质量浓度为60%的乙醇溶液浸泡30～40min，取出后用去离子水冲洗干净，再用质量浓度为5～10%的碳酸氢钠和浓度为1mmol/L的乙二胺四乙酸溶液分别煮沸10～15min，再用蒸馏水冲洗干净，去除透析袋表面的污染物质；（8）将上述溶解于磷酸缓冲液中的粗竹叶抗菌蛋白肽装入透析袋，在流动水中透析20～30h，直至透析液不能让氯化钡溶液变浑浊为止，之后将透析袋中的竹叶抗菌蛋白肽用液氮在‑30～‑20℃下冻干，经气流粉碎机粉碎，过50～60目钢筛，包装即得一种天然竹叶提取物抗菌剂。