基于微流控芯片的高通量快速检测疟疾血清的方法

摘要

本发明属于生物医学研究及临床应用领域，涉及血清免疫学检测方法。本发明以微流控芯片为基础，建立了专门用于高通量快速检测疟疾血清的方法，本发明方法在微流控芯片上同时进行两种疟原虫抗原的免疫学测定，将微流控芯片的分析能力和抗原-抗体反应的特异性相结合，能有效的克服常规免疫分析的缺点，使得反应效率提高，操作步骤简化，检验时间缩短，能大量降低病人血清样本使用量，试剂和能量消耗大大降低，从降低整个检测成本，同时该方法自动化程度高，能防止标本间的污染，提高检测准确性。

主权项

基于微流控芯片专门用于高通量快速疟原虫免疫学诊断芯片，其特征在于：所述的微流控芯片由样品富集及免疫分析模块和信号采集模块及对芯片的系统控制组成；该诊断芯片包括并联结构的芯片分析室，芯片分析室填有结合疟原虫蛋白抗原的聚合微球填料，所述的疟原虫蛋白抗原为重组疟原虫蛋白，其是恶性疟原虫的裂殖子表面抗原1、红细胞结合抗原175，或上述两种分子的的多肽片段；所述的微流控芯片采用PDMS高分子聚合材料制成；其中，所述的样品富集及免疫分析模块由并行的一个或几个单独的纳升体积的免疫色谱柱微分析室组成，每个分析室连接有多个进样空和出样口，每个分析室通过聚合填料键合固定抗体蛋白或抗原，与样品混合物中的抗原发生特异性免疫反应，由标记的反应物实现免疫分析信号；所述的重组疟原虫蛋白为标签融合蛋白，蛋白标签为组氨酸残基组成的融合标签、Flag标签、MBP麦芽糖结合蛋白标签、GST谷胱甘肽巯基转移酶标签、HA标签蛋白、C‑Myc标签蛋白、AviTag标签、SNAP‑Tag或HaloTag^TM标签；所述诊断芯片通过下述步骤高通量快速检测疟疾血清：(1)将抗疟原虫抗体泵入芯片分析室；所述的抗疟原虫抗体抗天然疟原虫蛋白抗体或重组疟原虫蛋白抗体；(2)不同的分析室泵入数个填料体积的不同的疟原虫蛋白溶液，通过特异性结合，使疟原虫蛋白抗原与聚合微球填料结合；(3)将含有5％牛白蛋白的磷酸盐缓冲液泵入芯片分析室，对结合了重组疟原虫蛋白抗原的聚合微球进行封闭；(4)一定量的血清经稀释后，泵入芯片分析室，血清中的抗不同疟原虫蛋白的抗体特异性与聚合微球上的重组疟原虫蛋白结合；(5)将标记的抗人抗体泵入芯片分析室；(6)由信号采集模块采集数据，并由软件进行分析。