一种人角膜基质细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种人角膜基质细胞系的构建方法。先将人角膜清洗、消毒，用眼科镊先后撕下角膜内皮与角膜上皮，剪成小的组织块后，用胰蛋白酶消化处理，然后将组织块平贴于培养孔的底部，加入培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，再更换人角膜基质细胞专用培养液继续培养，待细胞长成单层后进行继代培养，现已传至60代以上完成了人角膜基质细胞系的构建。本发明构建的人角膜基质细胞系可以连续传代，能提供出大量的人角膜基质细胞，且该细胞系的细胞未经任何转染，因此无致瘤性，可直接应用于人工角膜基质及全层角膜的研制和临床应用。

主权项

一种人角膜基质细胞系的构建方法，其特征在于所述的构建方法是先将角膜取出后用庆大霉素消毒，再撕除带有后弹力层的角膜内皮和带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的角膜基质组织块后进行消化处理，将角膜基质组织块按近后弹力层面向下平贴于培养孔的底部，然后先加入含有5％胎牛血清DMEM/F12培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，后将培养液更换为人角膜基质细胞专用培养液，细胞长成单层后用胰酶消化法进行继代培养，培养至第60代完成了人角膜基质细胞系的构建；其中，人角膜基质细胞专用培养液为含有20％胎牛血清、0.4‰～1.0‰羧甲基壳寡糖和0.01‰～0.02‰人碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养液。