基于乳液不对称PCR的ssDNA次级文库的制备方法

摘要

本发明涉及生物医学与临床医学技术领域，特别是一种基于乳液不对称PCR的ssDNA次级文库的制备方法；本发明首先合成引物和随机ssDNA文库，然后配置乳液-不对称PCR反应液；以乳液-不对称PCR反应液配置乳化液，进行乳液不对称PCR扩增，得到无副产物的目的产物，目的产物含生物素标记的dsDNA和无生物素标记的ssDNA；然后通过与链霉亲和素磁珠结合，将无生物素标记的产物分离出来，即为次级ssDNA文库；本发明建立的基于乳液不对称PCR的次级文库的制备方法，克服了其它方法的副产物问题，使PCR扩增步骤简单方便，同时由于没有副产物干扰，使下游的分离步骤变得简单高效。

主权项

一种基于乳液不对称PCR的ssDNA次级文库的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：S1. 合成引物和随机ssDNA文库：其中下游引物有生物素标记； S2. 配置乳液‑不对称PCR反应液：以步骤S1中随机ssDNA文库和引物为模板和引物配置乳液‑不对称PCR反应液；S3. 乳化液的制备：以步骤S2中的乳液‑不对称PCR反应液配置乳化液，其中乳化液中的水相为乳液‑不对称PCR反应液；油相为Span 80、Tween 80、Triton X‑100和 mineral oil的混合液;S4. 乳液不对称PCR扩增：把步骤S3中的分装的装有乳化液的PCR反应管，置入PCR仪中进行扩增；S5. PCR产物纯化：将步骤S4得到的PCR产物进行纯化，得到目标ssDNA次级文库和生物素标记dsDNA的混合物；S6. 链霉亲和素磁珠分离步骤S5中得到的目标ssDNA次级文库和生物素标记的dsDNA； S7. 结果检测：对得到的目标ssDNA次级文库的浓度和纯度进行检测。