Método de examen de una diana biológica para determinar interacciones débiles usando cromatografía de afinidad débil

摘要

Método de identificación de moléculas farmacológicas candidatas que presentan afinidad débil mediante el examen de una diana biológica para determinar interacciones débiles transitorias entre la diana y una biblioteca de ligandos, que comprende las etapas de: (i) proporcionar una composición de una diana biológica; (ii) proporcionar una pluralidad de fases estacionarias a partir de dicha composición inmovilizando una diana proteica en un soporte sólido en forma de partículas de sílice funcionalizada empaquetadas en pocillos de cromatografía; (iii) transportar una pluralidad de composiciones de ligando hasta dichas fases estacionarias, estableciendo de ese modo contactos entre dichos ligandos y dichas dianas; (iv) recoger, aguas abajo de dichas fases estacionarias, información de retardo zonal para cada ligando y detectar cuantitativamente dichos ligandos en composiciones que llegan de dichas fases estacionarias para discriminar entre diferentes afinidades de ligando para estimar la afinidad y la dinámica de cada interacción ligando/diana; y (v) seleccionar ligandos que presentan afinidad débil por dicha diana, en el que dichos ligandos tienen constantes de disociación (Kd) en el intervalo de 0,01 a 10 mM.