一种台湾蠛蠓分子鉴定方法

摘要

本发明公开一种台湾蠛蠓分子鉴定方法，其特征在于所述方法采用COⅠ基因和ITS2基因两种不同基因相结合，通过基因序列相似性的比对，对台湾蠛蠓进行种类鉴定。本发明提供的台湾蠛蠓分子鉴定方法，有利于实现台湾蠛蠓准确、快速的鉴定。为该蠓的分子鉴定提供依据。该新种可在植物花粉的传播及环境无害化反应中发挥一定作用。

主权项

一种台湾蠛蠓特异基因，其特征在于，所述特异基因序列为ITS2基因，为如下所述的基因序列SEQ ID NO.2：gcgtgtcacc atgtgaactg caggacacat gatcattgac atgttgaacg catattgcac     60ctcatgcgat tggattttaa tgtaaaagtt ataatctgtg tgtgaggtac acatggttga       120gtgtcgttat ttatatatta aactatcttg tgttataaca agtgcatgat gtggatatta          180aatgctgaaa aagcgttcaa taccatgaat gaaattagtg tgtgaagaga gaatatttcc    240acaataaatc ttaatttata tcaaatgtgg tctaaatgat ataatattct ttcacaattt           300tcttgacgac ctcaactc                                                                           318。2.一种台湾蠛蠓的分子鉴定方法，包括：1）从待测的昆虫组织中分离提取DNA；2）以该DNA为模板，对COⅠ基因采用的引物为：正向引物 5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’， 反向引物5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA 3’， 通过聚合酶链式反应扩增出台湾蠛蠓COⅠ基因；对于ITS2基因采用的引物为：正向引物 5’GATGAAGACCGCAGCAAACT 3’，反向引物 5’ATTTGGGGGTAGTCACACAT 3’），通过聚合酶链式反应扩增出台湾蠛蠓ITS2基因；3）然后取适量步骤2）的聚合酶链式反应扩增出的COⅠ基因和ITS2基因分别用琼脂糖电泳分离，经溴乙锭染色后于紫外灯下观察，根据扩增产物的大小判定结果，如果能相应特异性扩增出大小约为520 bp或大小约为360 bp的条带，送生物公司测序；4）根据测序结果，如果相应与COⅠ基因序列SEQ ID NO.1和ITS2基因序列SEQ ID NO.2的相似性均在98%以上，即可判断所述的待测组织即为台湾蠛蠓。