一种奶牛专用乳酸菌的制备方法

摘要

本发明公开了一种奶牛专用乳酸菌的制备方法，主要包含如下步骤：瘤胃乳酸菌的提取、菌株环境抗逆性的鉴定、分离株耐药性及抑菌试验、乳酸菌的扩大培养及活菌制剂的配制。与现有技术相比，本发明具有在动物胃肠道能长期定居、繁殖活性强、且抗生素的抑制效果不明显，能有效的发挥生物活性作用等特点。

主权项

一种奶牛专用乳酸菌的制备方法，其特征在于主要包含如下步骤：a、瘤胃乳酸菌的提取：利用乳酸菌选择SL培养基从健康奶牛的瘤胃液进行菌群的分离鉴定，分离出乳酸菌菌株；b、菌株环境抗逆性的鉴定：分离株乳酸菌的环境抗逆性鉴定与筛选：将a步骤中分离出的菌株先通过API50CHL生化鉴定试剂盒鉴定到种，根据生长特性选取其中的28～34株菌株，在pH2～4、0.2～0.4％的胆盐、25℃—40℃环境下进行培养，筛选出2～4株生长良好，具有较强的环境抗逆性的嗜乳酸杆菌及发酵乳杆菌；c、分离株耐药性及抑菌试验：耐药试验：将筛选出的具有良好环境抗逆性的菌株进行扩大培养，并在培养基中添加阿洛西林、青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林、新霉素、庆大霉素、链霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、林肯霉素、红霉素中的至少一种抗生素，筛选出对以上药物耐受超过百分之八十的菌株；之后进行抑菌实验：对牛源致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的拮抗抑制作用的实验；将大肠杆菌或金黄色葡萄球菌涂抹在实验培养基上，再在培养基上接种筛选出的乳酸菌，观察抑菌斑的大小为抑菌圈直径分别为18.3mm和16.4mm；d、乳酸菌的扩大培养及活菌制剂的配制：用大麦芽汁400～600mL、水400～600mL，胰蛋白胨8～12g，酵母膏5～10g，碳酸钙2～4g，分别制成固体和液体培养基，将分离株接种后置于5％CO₂培养箱培养18～30h，乳酸菌扩大培养浓度分别可以到达3.5×10⁸CFU/mL、1.2×10⁷CFU/mL。