甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，新鲜甘蔗叶洗净剪碎，按每克甘蔗叶添加4mL冷丙酮，并通过匀浆、抽滤、冷冻干燥得到甘蔗叶丙酮粉，按每克甘蔗叶丙酮粉加入3℃、pH6.5、浓度为0.1mol/L磷酸缓冲液6mL，通过冷冻浸提、过滤、冷冻离心，得到甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液，并经凝胶排阻柱层析、纯化、真空下冷冻干燥后得到多酚氧化酶粉末。通过本发明能够获得廉价、量大、具有高酶活力的多酚氧化酶，为甘蔗的综合利用和甘蔗叶多酚氧化酶的工业应用以及环境保护提供参考。

主权项

甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，采集新鲜甘蔗叶洗净并剪成碎块，按每克甘蔗叶碎块添加4 mL冷丙酮，高速匀浆捣碎1分钟，停止30秒然后再次高速匀浆捣碎1分钟，形成悬浊液，将悬浊液用双层定性滤纸抽滤，所得滤渣用所述冷丙酮洗至呈白色为止，冷冻干燥所述滤渣，得到甘蔗叶丙酮粉，按每克甘蔗叶丙酮粉加入3℃、pH6.5、浓度为0.1mol/L磷酸缓冲液6 mL，冷冻浸提后用纱布进行过滤，收集滤液，将所述滤液以10000 r/min冷冻离心20分钟，收集上清液得到甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液，所得甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液采用Sephacryl S200进行凝胶排阻柱层析，收集活性组分，运用DEAE Sephadex A50纯化，得到甘蔗叶多酚氧化酶纯液，在真空下冷冻干燥得到甘蔗叶多酚氧化酶粉末；所述冷丙酮温度为‑10℃；所述滤渣冷冻干燥、冷冻浸提、冷冻离心的温度均为3℃；所述冷冻浸提时间为4小时。