使用工程改造的内含肽生产肽的方法

摘要

本发明提供通过重组手段生产肽的方法。肽作为包含靶肽和工程改造的内含肽的融合蛋白的一部分表达。本发明还提供工程改造的内含肽、包含所述内含肽的融合蛋白和编码这些融合蛋白的DNA构建体。在硫醇基诱导切割融合蛋白时，得到靶肽的羧基端α-硫酯。羧基端α-硫酯原则上可与任何亲核体反应，因此该策略允许更大范围的羧基端修饰例如化学连接、生物缀合或酰胺化。本发明的工程改造的内含肽在大小上被减到最小，并且通过与Mxe GyrA内含肽(SEQ ID NO:1)的3位的比对在相应位置上具有半胱氨酸突变，导致融合蛋白的表达水平提高和分离靶肽的产量较高，因此使本发明的方法适于生产规模。

主权项

一种用于生产肽的方法，所述方法包括将肽作为融合蛋白的一部分表达的步骤，其中所述融合蛋白包含靶肽和工程改造的内含肽，其中所述内含肽的大小被减到最小，并且通过与Mxe GyrA内含肽(SEQ ID NO:1)的3位对齐在相应位置上携带半胱氨酸突变。