一种用于大肠杆菌基因敲入的负筛选标记

摘要

本发明涉及一种用于大肠杆菌基因敲入的负筛选标记，即plac启动子驱动的毒性基因ccdB。plac-ccdB和庆大霉素抗性基因aacC1组成用于基因敲入的基因盒。第一步扩增得到含同源臂plac-ccdB-aacC1的DNA片段，电转化至表达重组酶的大肠杆菌。在庆大霉素筛选之下，重组酶催化同源重组而将此DNA片段整合至大肠杆菌基因组。第二步利用相同的同源臂扩增外源DNA片段，电转化表达重组酶的第一步所得菌株，在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷筛选之下，ccdB表达，其毒性作为负筛选标记的特征，重组酶催化同源臂之间的同源重组，外源DNA片段取代plac-ccdB-aacC1基因盒而实现基因敲入。

主权项

plac启动子驱动的毒性基因ccdB作为大肠杆菌基因敲入的负筛选标记的应用。