发明名称 |
一种结核杆菌DNA的提取纯化方法 |
摘要 |
本发明提供了一种结核杆菌DNA的提取纯化方法,能有效克服提取结核杆菌DNA中最大难点:如何破其牢固的细胞壁,提取方法包括以下步骤:细菌悬液经pH为8.0的EDTA洗涤离心弃上清后,加入pH为8.0的TES缓冲液和5%(W/V)的SDS溶液,加入pH为8.0的TES缓冲液和5%(W/V)的SDS溶液后,置于温水浴30~50min,再置于沸水浴30~50min,最后在冰上放置3~7min,得到混悬液。本发明提供的提取方法操作简单,得到的结核杆菌DNA的纯度和浓度较高,提取效率高。 |
申请公布号 |
CN105219763A |
申请公布日期 |
2016.01.06 |
申请号 |
CN201510749457.7 |
申请日期 |
2015.11.06 |
申请人 |
昆明医科大学 |
发明人 |
柳爱华;宝福凯;杨佳儒;徐平;赵华;陶律延;彭芸;麻明彪 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I;C12R1/32(2006.01)N |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
昆明今威专利商标代理有限公司 53115 |
代理人 |
赛晓刚 |
主权项 |
一种结核杆菌DNA的提取纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取结核杆菌的细菌悬液于试管中;(2)用pH值8.0的0.01M EDTA洗涤细菌,离心后沉淀,弃上清液;(3)向步骤(2)的沉淀中加入pH值为8.0的TES,5%(W/V)SDS,于35~40℃下溶解30~60min后沸水浴30~60min,再于冰上放置3~7min;(4)向步骤(3)的产物中加入pH值4.8的NaAc和浓度为0.05mol/l的葡萄糖,颠倒混匀后冰上放置3~7min;(5)向步骤(4)获得的试液中加入苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),颠倒混匀后于离心处理后沉淀,取上层水相;(6)向步骤(5)中的上层水相中加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1),颠倒混匀并离心处理后沉淀,取上层水相;(7)向步骤(6)中的上层水相中加入无水乙醇,充分震荡后离心处理后,在-5~-30℃下沉淀20~40min;(8)取步骤(7)的沉淀物,晾干3‑5分钟,加入TE缓冲液,得到结核杆菌DNA溶液。 |
地址 |
650500 云南省昆明市呈贡新城雨花街道春融西路1168号 |