黄绿蜜环菌发酵液有效部位的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种黄绿蜜环菌发酵液有效部位的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴配制发酵培养液；⑵制备黄绿蜜环菌发酵液：发酵培养液灭菌后接入黄绿蜜环菌生产菌种发酵，即获得黄绿蜜环菌发酵液；⑶黄绿蜜环菌发酵液经减压浓缩至其体积的1/3~1/5时，即得黄绿蜜环菌发酵液浸膏；⑷黄绿蜜环菌发酵液浸膏经水提、浓缩、醇沉后分别得到上清液和醇沉物；醇沉物经真空冷冻干燥即得发酵液粗多糖有效部位；⑸上清液经丙酮提取、浓缩、过滤、色谱分离、干燥即得发酵液甾醇类有效部位；或上清液经减压浓缩、过MCI型树脂柱、洗脱、干燥即得核苷类有效部位。本发明工艺简单、易于实施。同时本发明还提供了该黄绿蜜环菌发酵液有效部位的应用。

主权项

黄绿蜜环菌发酵液有效部位的制备方法，包括以下步骤：⑴配制发酵培养液：由10~30%马铃薯浸提液、10~30%豆芽浸提液、5~10%葡萄糖、1~5‰ KH₂PO₄、1~5‰ MgSO₄、0.1~1‰微量盐、0.1~1mg/L VB₁、0.1~1mg/L VB₂配制而成的pH值为5.5~7.5的培养液；⑵制备黄绿蜜环菌发酵液：所述发酵培养液在温度为121℃、蒸汽压力为103KPa的条件下灭菌20min后，将其温度降至室温，并在该室温、无菌条件下，按5~10%的接种量接入黄绿蜜环菌生产菌种，在装料系数为65%~75%、搅拌速度为50~150rpm、通气量为0.1~0.3vvm、培养压力为0.01~0.05MPa、发酵温度为25~28℃条件下发酵10~15d，即获得黄绿蜜环菌发酵液；⑶所述黄绿蜜环菌发酵液经减压浓缩至其体积的1/3~1/5时，即得黄绿蜜环菌发酵液浸膏；⑷在所述黄绿蜜环菌发酵液浸膏中加入其体积5~10倍蒸馏水，在65~85℃下加热回流提取 1~3次，每次3h，抽滤，合并得到滤液；所述滤液经减压浓缩后得到浓缩液A，该浓缩液A中加入其5~10倍体积的体积浓度为95%的乙醇进行醇沉，12~24h后分别得到上清液和醇沉物；所述醇沉物经真空冷冻干燥即得发酵液粗多糖有效部位；⑸所述上清液用其体积10~30倍的丙酮在室温静置提取1~3次，每次提取60~84h，得到丙酮提取液，该丙酮提取液经减压浓缩后得到丙酮提取物；所述丙酮提取物中加入3~9倍体积的正己烷‑乙酸乙酯混合液进行溶解，得到溶解液，该溶解液过0.45μm有机滤膜，得到滤液；所述滤液在以10μm硅胶为分离基质的制备色谱上分离，收集目标馏分，该目标馏分经减压干燥即得发酵液甾醇类有效部位；或将所述上清液经减压浓缩除去乙醇后，得到浓缩液B，该浓缩液B用其体积1~3倍的水溶液溶解后过MCI型树脂柱，并分别按2~5倍的柱体积用水、80%的乙醇‑水洗脱，收集80%的乙醇‑水洗脱液，该80%的乙醇‑水洗脱液经减压干燥即得核苷类有效部位。