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La présente invention décrit l'élaboration d'hydrolysats protéiques de muscle de gobie (Z. ophiocephalus) riches en peptides bioactifs, par l'action d'enzymes protéolytiques microbiennes, et plus particulièrement l'invention décrit le fractionnement de l'hydrolysat et la caractérisation des fractions obtenus. Selon le procédé de l'invention, l'obtention de peptides inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (ECA) repose sur une hydrolyse enzymatique contrôlée des protéines du muscle de gobie sous l'action de protéases exogènes, suivie de méthodes systématiques de fractionnement, de tests biologiques. L'optimisation de la protéolyse enzymatique a permis de déterminer la préparation enzymatique et le degré d'hydrolyse (DH) de l'hydrolysat protéique exerçant l'activité la plus élevée. L'activité anti-ECA des hydrolysats élaborés, a été étudiée en utilisant le HHL (Hippuryl-Histidine-Leucine) comme substrat. Tous les hydrolysats manifestent une activité inhibitrice de l'ECA et l'hydrolysat protéique traité avec la préparation protéolytique de Bacillus mojavensis A21 présente l'activité antihypertensive la plus élevée 67,95% pour un DH d'environ 13,21% et une concentration de 2,5 mg/ml. L'hydrolysat protéique ayant un DH de 11,07% qui exerce l'activité la plus élevée, obtenu à l'aide de la préparation de A21 a été ensuite fractionné sur une colonne de gel filtration Sephadex G-25 en cinq fractions majoritaires (F1-F5). La fraction F5 présente le pouvoir d'inhibition de l'ECA le plus important (IC50 = 0.32 ± 0,01 mg/ml). La fraction F5 a été soumise à un nouveau fractionnement par RP-HPLC sur colonne de silice C18 en phase inverse. Le profil obtenu présente un grand nombre de pics ce qui indique l'abondance de peptides générés. Quatre sous fractions ont été collectées puis concentrées par speed-Vac. Le test de l'activité anti-ACE a montré que toutes les sous fractions sont actives et que le maximum d'activité est obtenu avec la fraction F5-2 (99% à 0.5 mg/ml). Cette dernière présente une CI50 de l'ordre de 0,1±0,02 mg/ml. L'analyse des fractions actives par ESI-MS/MS a montré que la sous-fraction F5-2 renferme 5 peptides : Ala-Arg-Ser, Val-Val-Ala-Pro-Phe-Ala-His-Gly-Thr, Arg-Ser-Thr-Ala, Phe-Tyr-Pro-Pro, Arg-Cys-Ser-Ala-Gly-Val. De plus 15 peptides ont été identifiés dans la sous fraction F5-4. |
