发明名称 |
一种用于扩增灰葡萄孢菌四个基因的方法及其多重PCR引物组 |
摘要 |
一种用于扩增灰葡萄孢菌四个基因的方法及其多重PCR引物组涉及分子生物学领域。本发明是在已知灰葡萄孢菌对苯并咪唑类、啶酰菌胺类、异菌脲和环酰菌胺等多种杀菌剂的抗药性突变位点的基础上,建立的一种用于同时扩增β-tub、BsOS1、erg27、SdhB四种基因片段的PCR引物组。本发明可直接采用提取的灰葡萄孢菌基因组作为模板,用设计的引物组对模板进行扩增,获得富集的四个基因片段。本发明是首次采用多重PCR方法对灰葡萄孢菌的四个抗药性突变基因进行同时扩增,为后期抗药位点的检测大大减少了工作量。本发明经过对PCR反应体系的优化,将四个基因片段在同一PCR反应中进行扩增。 |
申请公布号 |
CN105154432A |
申请公布日期 |
2015.12.16 |
申请号 |
CN201510593450.0 |
申请日期 |
2015.09.17 |
申请人 |
北京工业大学 |
发明人 |
马雪梅;张鑫;吕宝北;赵鹏翔;谢飞 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 |
代理人 |
刘萍 |
主权项 |
一种用于扩增灰葡萄孢菌四个基因的方法,其特征在于共分两步:第一步:提取灰葡萄孢菌基因组第二步:进行PCR反应:采用四对引物,分别用于扩增灰葡萄孢菌β‑tub、BsOS1、erg27、SdhB基因,四对引物分别为SEQ ID NO:1 CGATACCGTTGTCGAGCCATSEQ ID NO:2 GGTTGCTGAGCTTCAAGGTTSEQ ID NO:3 ACACCGACCCAGCACCAGASEQ ID NO:4 TTAGCAATAACCGCCCAAASEQ ID NO:5 CACCCGCGTAGCAAGAGATGSEQ ID NO:6 TGAGTCAGGTCTCCCTTTGCSEQ ID NO:7 ATCATGCCCTTGAATTTTGTGSEQ ID NO:8 CTTTGCCTCCCCTTTCTTCTCPCR反应混合液中含有提取的待测样品的基因组DNA作为PCR反应的模板,反应体系如下,<img file="FDA0000804525440000011.GIF" wi="1081" he="1314" />PCR反应程序:94℃5min;94℃30sec,59℃30sec,72℃20sec;72℃10min。 |
地址 |
100124 北京市朝阳区平乐园100号 |