白唇竹叶青蛇毒降纤酶的制备方法

摘要

本发明白唇竹叶青蛇毒降纤酶及其制备方法和在制药中的应用，属生物医学领域。白唇竹叶青蛇毒降纤酶，是从我国产的白唇竹叶青蛇的毒液中分离纯化得到的一种金属蛋白酶，并具有同时降解纤维蛋白原Aα链和Bβ链的活性，其在聚丙烯酰胺凝胶电泳上的表观分子量还原和非还原条件下为66300道尔顿。其制备方法包括以下步骤：(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理；(2)DEAE-SephadexA-25离子交换层析；(3)DEAE-Sephadex G-100凝胶层析；(4)CM-SephadexC-25阳离子交换层析。白唇竹叶青蛇毒降纤酶具有较强的同时降解纤维蛋白原Aα链和Bβ链的活性，作为制备治疗血栓疾病的应用。

主权项

1、一种白唇竹叶青蛇毒降纤酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理：收集的白唇竹叶青蛇毒液集中后冷冻干燥制得粗毒冻干粉，取白唇竹叶青蛇毒粗毒冻干粉1～5g，溶于5ml pH 7.5～8.5，0.04～0.06mol Tris-HCl缓冲液中，用离心机以3000～5000r/min离心8～12min，取上清液待用；(2)DEAE-Sephadex A-25离子交换层析用浓度0.04～0.06mol/L，pH 7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液平衡SephadexA-25柱；将步骤(1)中制得的上清液上样，用浓度范围0.01～0.6mol/LNaCl 1000ml和0.04～0.06mol Tris-HCl缓冲液线性剃度洗脱，洗脱流速为0.20～0.30ml/min，将SephadexA-25柱层析分离出的I峰洗脱液冷冻干燥，溶解于3ml 0.01～0.6mol/L Tris-HCl缓冲液中制得待用溶液；(3)DEAE-Sephadex G-100凝胶层析用pH 7.5～8.5，0.01～0.02mol/L Tris-HCl缓冲液平衡DEAE-SephadexG-100凝胶层析柱，将步骤(2)中最后制得的待用溶液上样，洗脱流速为0.11～0.17ml/min，将DEAE-Sephadex G-100凝胶层析柱分离出的I峰洗脱液冷冻干燥分离物待用；(4)CM-Sephadex C-25阳离子交换层析用pH 5～6.5，浓度0.009～0.011mol/L的NaAc缓冲液平衡CM-SephadexC-50层析柱，把步骤(3)最后得到的I冷冻干燥待用分离物上样，用上述缓冲液洗脱，洗脱流速为0.20～0.30ml/min。