摘要 |
AMPLIFICAçãO E CLONAGEM DE MOLéCULA DE úNICO DNA USANDO AMPLIFICAçãO DE CìRCULO ROLANTE. A presente invenção refere-se, por exemplo, a um método para amplificar um pequeno número de cópias (por exemplo, uma única cópia) de uma molécula de DNA circular de filamento único (por exemplo, tendo um tamanho de cerca de 5 a 6 kb) por um mecanismo de círculo rolante isotérmico, usando iniciadores aleatórios ou parcialmente aleatórios e uma DNA polimerase tipo-F29. Método, o qual também pode ser usado para amplificar DNAs por tipos não rolantes de amplificação de múltiplos deslocamentos, compreende incubar os componentes da reação em um pequeno volume, por exemplo, cerca de 10 <109>l ou menos, tal como cerca de 0,6 <109>d ou menos. O grau de amplificação pode ser cerca de 109 vezes, ou superior. é descrito um método para clonagem de DNA livre de células, usando o método de amplificação de círculo rolante da invenção.
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