一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体R485P及其应用

摘要

本发明公开了一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体R485P及其应用，属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将米根霉的丙酮酸羧化酶的R485位点突变成了脯氨酸，得到的突变体酶活提高了24.8％。在敲除PDC1和ADH1的基础上敲除基因FUM1，同时过量表达丙酮酸羧化酶突变体R485P，发现延胡索酸产量提高了31.1％。同时通过添加32μg/L的生物素，延胡索酸产量达到332±12mg/L，与对照组(290±10.7mg/L)相比提高了16.1％。该发明有效强化了碳代谢流由丙酮酸进入延胡索酸的合成途径，为构建工程酵母高效生产延胡索酸及其它二元羧酸创造了条件，具有很好的工业应用价值和前景。

主权项

一种丙酮酸羧化酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的米根霉丙酮酸羧化酶的基础上，将第485位的精氨酸突变成为脯氨酸。