蜡蚧轮枝菌的荧光定量PCR检测方法及其试剂盒

摘要

本发明提供了一种蜡蚧轮枝菌种水平荧光定量PCR检测方法，其是针对蜡蚧轮枝菌的ITS片段中的种特异序列，设计出特异性引物和Taqman-TAMRA探针，建立了快速检测蜡蚧轮枝菌的Real-time PCR检测方法。该方法具有较高的灵敏性和良好的特异性，所检测的含有蜡蚧轮枝菌的样品均显示为阳性结果，所检测的近缘种及常见环境杂菌均为阴性结果。本方法可以检测到100个拷贝/反应体系的目的片段。同时进行了昆虫宿主或土壤模拟标本的检测，单头蚜虫接种培养3d时虫体内含有的蜡蚧轮枝菌的菌量即可被检出，土壤模拟标本中1.0×10²个孢子/克土的蜡蚧轮枝菌的菌量可以被检出。

主权项

蜡蚧轮枝菌种水平荧光定量PCR检测方法中，同时应用的特异性引物和探针，其特征在于，正向特异性引物为LecF27：5’‑CTCCCAAACCCTTATGTGAACATAC‑3’，反向特异性引物为LecR149：5’‑GCGGATTCAGAAAATGCTGATAA‑3’，特异性探针为LecP28：5’‑FAM‑TACTGTTGCTTCGGCGGACTCGCC‑TAMRA‑3’。