一种酶信号循环放大高灵敏免疫检测方法

摘要

本发明涉及酶联免疫（ELISA）领域，特别是一种抗HRP多抗-HRP复合物应用于ELISA技术，从而获得酶信号循环放大。基于酶信号循环放大免疫检测方法，适合于各种类型的基于酶信号放大的免疫检测系统，该免疫检测系统的优势是能够最大程度上提高其检测灵敏度。

主权项

一种酶信号循环放大高灵敏免疫检测方法，其特征在于：制备抗酶抗体‑酶标记复合物，所述抗酶抗体‑酶标记复合物为抗HRP多抗‑HRP复合物或者抗AP多抗‑AP复合物，制备时，采用相应纯化的酶免疫动物，得到含有抗酶抗体的动物血清；先用(NH₄)₂SO₄沉淀法从动物血清中初步纯化免疫球蛋白IgG，再用ProteinA‑Sepharose亲和层析柱进一步纯化抗酶的IgG，SDS‑PAGE及Western blotting鉴定分离纯化的抗酶多抗，取上述纯化后的抗酶多抗，加入一定量的酶形成不饱和的抗酶多抗‑酶标记复合物；采用制得的抗酶抗体‑酶标记复合物在传统ELISA检测模式上进行酶信号的循环放大，所述传统ELISA检测模式为如下检测模式中的任一种：双抗原夹心测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体/抗原、亲和素‑生物素‑ELISA。