一种制备绵羊MSTN基因单克隆抗体疫苗的方法

摘要

本发明涉及一种制备绵羊MSTN基因单克隆抗体疫苗的方法：运用生物信息学方法分析并筛选绵羊MSTN基因单克隆抗体所需抗原肽的抗原表位，把这些抗原表位核苷酸序列串联组合，克隆并原核表达这些表位组合模式，将获得的相关抗原肽分别免疫小鼠，用杂交瘤细胞融合技术分别制备针对绵羊MSTN基因特异不同组合模式抗原表位的单克隆抗体，筛选并检测这些细胞株，从而获得具有较高效价的针对绵羊MSTN基因不同抗原表位的单克隆抗体疫苗。本发明采用单克隆抗体技术制备抗绵羊MSTN基因编码蛋白的单克隆抗体，这种抗体只能特异地与抗原分子上的一个抗原决定簇结合反应，在培养过程中只要不发生变异，不同时间内分泌的抗体都能保持同样的结构和功能。本发明简便易行，易于推广，免疫绵羊后可以使绵羊MSTN基因失活，从而使绵羊产生双肌表型，大大提高单位绵羊的产肉率。

主权项

一种制备绵羊MSTN基因单克隆抗体疫苗的方法，其特征在于，依下述方法步骤进行：(1)利用生物信息学方法分析并筛选绵羊MSTN基因的抗原表位；(2)将这些抗原表位串联成3种组合模式，人工合成这些绵羊MSTN基因抗原表位组合模式，三种组合抗原表位基因的大小分别为100bp、160bp和300bp的小DNA片段。所述步骤2中的3种MSTN抗原表位组合模式分别为3个抗原表位组合、5个抗原表位组合和7个抗原表位组合，三种组合模式的抗原肽氨基酸编码序列具体为：D6494‑1hz‑2‑bQRDDSSDGSL‑Linker‑DLLAEVQEKP‑Linker‑PKRSRRDFGLD6494‑1hz‑3‑cSEQKENVEKK‑Linker‑KFSSKIQHNK‑Linker‑ISKDAIRQLL‑Linker‑KPMKDGTRYT‑Linker‑LWRQNNKSSRD6494‑1hz‑4‑dRLETAPNISK‑Linker‑GKIPGMVVDR‑Linker‑ENGHDLAVTF‑Linker‑LDMNPGTGIW‑Linker‑TFPEPGEEGL‑Linker‑HQANPKGSAG‑Linker‑PVKTPTTVFV三种组合抗原肽分子量大小分别为26kDa、28kDa和32kDa。(3)利用基因克隆与原核表达技术分别进行这些抗原表位组合模式的克隆与原核表达，利用PCR、酶切、序列测定检测基因克隆结果；利用SDS‑PAGE技术检测原核表达的结果，检测结果表明获得了上述序列正确的3种组合模式的抗原肽；(4)免疫小鼠，并检测血清抗体效价，在抗体效价达到要求后获取小鼠脾脏B淋巴细胞；(5)准备骨髓瘤细胞，并将骨髓瘤细胞与前面制备好的小鼠脾脏B淋巴细胞进行细胞融合；(6)进行杂交瘤细胞的克隆化培养，并检测杂交瘤细胞的抗体效价；(7)利用Western Blot技术检测抗原抗体的特异性结合，并用ELISA法检测单克隆抗体的抗原性；(8)最后，进行单克隆抗体亚型的鉴定。