提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达量的方法

摘要

本发明公开了一种提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达量的发酵方法，该编码基因的核苷酸序列SEQ ID NO：1，重组人胱抑素C的表达方法，包括以下步骤：直接合成并优化密码子，将重组人胱抑素C插入到原核表达载体的多克隆位点，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌，筛选阳性克隆，得工程菌，工程菌经发酵、诱导、分离、纯化，得重组人胱抑素C。通过优化发酵罐的溶氧，pH，搅拌速率，补料条件，使蛋白的产量可以达到0.4g/L，且活性和天然胱抑素C蛋白相近。本发明提供的重组胱抑素C发酵放大生产方法，操作简单，且表达的胱抑素C产量高达0.4g/L，纯度达到95％以上，同时利用重组人胱抑素C蛋白制备多抗血清和标准品，目前未见表达效率更好的报道。

主权项

一种提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，通过分子操作构建获得表达载体CYS‑C‑pPET22b(+)，转化宿主DE3(E.coli Rosetta)，获得工程菌。