水稻双T-DNA转基因非连锁整合的分子标记检测方法

摘要

本发明公开了一种水稻双T-DNA转基因非连锁整合的分子标记检测方法。通过本发明的方法，转基因T₀代即可鉴定出目标基因与选择标记基因是否连锁整合，淘汰连锁整合的转基因克隆，从而极大地提高无选择标记基因水稻的培育效率。

主权项

水稻双T‑DNA转基因非连锁整合的分子标记检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将以双T‑DNA表达载体pCDMAR‑Hyg构建的任意目的基因的表达载体，通过农杆菌介导转化到水稻中，获得T₀代独立转化子，对独立转化子转基因苗利用潮霉素基因标记和目的基因标记进行基因型分析，筛选得到两个基因共整合的转化子；(2)分别提取上述筛选得到的两个基因共整合转化子的叶片DNA，利用特异分子标记Link‑1引物对所提取的DNA进行PCR扩增，标记Link‑1引物序列如下：正向引物：5′‑GCATTTGTAGGTGCCACCTTC‑3′；反向引物：5′‑CCAAGGGCTGCAGGAATTAAT‑3′；(3)经PCR反应扩增共整合植株DNA，进行电泳观测，如果转基因植株在2516bp位置无任何条带，则说明双T‑DNA为非连锁整合，如果在2516bp位置出现目标条带，则说明双T‑DNA为连锁整合。