一种质粒DNA提取方法

摘要

本发明提供一种质粒DNA提取方法，其包括以下步骤：挑选单一的菌落在含有抗生素的液体培养基中进行扩大培养；向离心管中加入溶液I，充分悬浮细菌沉淀，加入溶液II，缓慢翻转数次，充分裂解2-6min，之后加入溶液III，翻转数次至形成白色聚合物，室温放置2-4min，将得到的溶液离心后，取上清放置在收集管的离心柱上；离心后，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱，向离心柱内加入清洗液A，离心后弃滤液，之后向离心柱内加入清洗液B，离心后弃滤液并重复该步骤2-3次，将离心柱放入无菌工作台的无菌管内，加入预热后的TE缓冲液，静置1min，离心后去掉离心柱，无菌管内得到目的DNA。本发明价格低廉，可大规模的制备，用于科研和药物生产等领域都具有良好效果。

主权项

一种质粒DNA提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：S1、细菌的培养：挑选单一的菌落在含有抗生素的液体培养基中进行扩大培养，在35℃‑40℃下培养12‑16小时，将培养后的菌液无菌封装在至少两个离心管中，离心后，放弃上清；S2、细菌的裂解：向离心管中加入溶液I，充分悬浮细菌沉淀，加入溶液II，缓慢翻转数次，充分裂解2‑6min，之后加入溶液III，翻转数次至形成白色聚合物，室温放置2‑4min，溶液I、溶液II和溶液III的摩尔比为1∶1∶1.4；S3、质粒DNA的分离：将S2得到的溶液离心后，取上清放置在收集管的离心柱上；S4、质粒DNA的收集：离心后，弃掉收集管内的废液，继续装载离心柱，向离心柱内加入清洗液A，离心后后弃滤液，之后向离心柱内加入清洗液B，离心后弃滤液并重复该步骤2‑3次，将离心柱放入无菌工作台的无菌管内，加入预热后的TE缓冲液，静置1min，离心后去掉离心柱，无菌管内得到目的DNA，放入‑20℃保存或者常温干燥保存，其中清洗液A和清洗液B的摩尔比为5∶7。