基于目标DNA重复序列自身增强放大信号的DNA电化学传感器

摘要

本发明公开一种基于目标DNA重复序列自身增强放大信号的DNA电化学传感器，通过所检测目标链的重复序列片段设计信号探针，使得结合到目标序列上的信号探针的量发生扩增，形成复合物，当电极表面的捕获探针与目标序列杂交时，扩增的信号探针则被结合到电极表面，信号探针末端标记的生物素与辣根过氧化物酶上修饰的亲和素的亲和作用，使多个酶结合到“三明治”结构上，最后通过酶的高效催化作用，催化H₂O₂氧化TMB，氧化产物在电极上产生放大了的还原电流信号，由电流信号大小判断所检测目标DNA的浓度。本实验利用重复序列目标链自身增强放大信号的特点，实验对含有两段重复序列的目标链进行检测，该方法具有较高的灵敏度。

主权项

一种基于目标DNA重复序列自身增强放大信号的DNA电化学传感器的检测方法，包括以下步骤：（1）将目标DNA与50 nmol/L信号探针DNA混合，配制成杂交溶液；（2）将DNA电化学传感器放在步骤（1）所得到的杂交溶液中，在44 ^◦C下杂交 60 min后，取出用双蒸水清洗，氮气吹干；（3）在经过步骤（2）处理的DNA电化学传感器的电极表面滴加3 µl HRP‑avidin 酶溶液，室温下反应30 min，用含有0.05 % Tween‑20的PBS洗液搅拌清洗5 min；（4）将经过步骤(3)处理的DNA电化学传感器浸入到1 ml含H₂O₂的 TMB底物溶液中，以铂丝电极为对电极，Ag/AgCl 为参比电极，记录电流‑时间曲线；所述DNA电化学传感器按如下步骤制备：（1）蛋白质控制组装界面的构建：将金电极浸泡在0.1 wt %的牛血清白蛋白BSA溶液中，在室温下组装15 min后，用双蒸水清洗，氮气吹干；（2）捕获探针的组装：取捕获探针DNA溶液，滴涂到已组装牛血清白蛋白BSA的金电极表面，室温放置1 h后，以双蒸水冲洗电极表面，氮气吹干；所述的捕获探针DNA为5’‑CCGGATGATGGTGGT GCTGAAGGTTTCCGT T₁₀‑(CH₂)₆‑SH‑3’，所述的信号探针DNA为5’‑GTTTCCGTCC CCTCTCGGGGTTTTGGGTCTGACGAC‑Biotin‑3’，所述的目标DNA为5’‑ ACGGAAACCTTCAGCACCACCATCATCCGGCGCCTCAGCTCAGC ATGTCGTCAGACCCAAAACCCCGAGAGGGGACGGAAACCCTTCGACGCCGGATTCGTG ATCTCTTCCCGCGGATAGGTCGTCAGACCCAAAACCCCGAGAGGGGACGGAAAC ‑ 3’。